8. Учет результатов

Учет результатов проводится инструментально с помощью приборов измерения (типа: "Мультискан", "Униплан", "Биоскрин", "Стат-Факс" и др.) с длиной волны оптической плотности 492 нм или 450 нм или визуально. Визуальный учет результатов анализа возможен в тех случаях, когда это предусмотрено инструкцией по применению.

Оценку результатов проводят только в том случае, если окраска субстратной смеси в лунках с положительным контрольным образцом имеет интенсивное окрашивание, а в лунках с отрицательным контрольным образцом и контролем конъюгата (без сыворотки) - бесцветная или слабоокрашенная и (или) регистрируемая оптическая плотность (ОП) в лунках с контрольными образцами должна соответствовать таковым, определяемым инструкцией по применению.

При визуальном учете результатов реакции положительной считают

исследуемую сыворотку, если обусловленная ею окраска субстратной

смеси более интенсивная, чем в лунках с диагностическим контролем

(К ) на стрипах с этим же антигеном. При инструментальном учете

д

положительно реагирующей с антигеном считают сыворотку, если ее

значение ОП в начальном разведении (определяемое согласно

инструкции) превышает значение ОП диагностического контроля в том

же разведении на стрипах с этим же антигеном.

Скрининг

Исследуемую сыворотку считают положительной, если значение ее ОП в диагностическом разведении равно или превышает значение диагностического уровня (ДУ):

- ОП в 2 - 3 раза;

К-

- ОП, вычисленного по приведенной в инструкции расчетной

формуле диагностического уровня;

- ОП .

Кд

Существует метод учета концентрации специфических антител, выраженный в международных единицах (МЕ/мл), в этом случае оценку результатов проводят по калибровочной кривой, построенной по результатам ОП стандартных, приложенных к тест-системе тест-образцов с определенной концентрацией АТ, выраженной в МЕ/мл.

Другой метод определения концентрации специфических антител предложен Всемирной организацией здравоохранения 1987 г. В этом случае концентрация выражается в антительных единицах (АЕ). Формула расчета АЕ следующая:

АЕ = (ОП - ДУ / ОП - ДУ) х 100,

исп К+

где:

ОП - ОП испытуемой сыворотки;

исп

ДУ - ОП диагностическая;

ОП - ОП контрольного положительного образца.

К+

Раститровка

При определении титра антител за титр принимают то наибольшее

ее разведение, при котором значение ОП равно или превышает

значение ОП диагностического уровня по инструкции. В ряде случаев

титр сыворотки определяют по ее разведению, при котором показатель

ее ОП превышает в 2 - 3 раза ОП в диагностическом разведении,

К-

что определяется инструкцией по применению.

Следует учитывать, что реакция окисления ОФД при добавлении серной кислоты до конца не останавливается. Поэтому измерять оптическую плотность в лунках необходимо не позднее чем через 30 мин. после добавления серной кислоты в качестве стоп-реагента.

Если в инструкции по применению не введено понятие "серой зоны", то желательно учитывать возможное влияние ошибок дозирования пипеткой (5%) и измерения оптической плотности спектрофотометром (10%). Таким образом, сыворотки, оптическая плотность которых после постановки ИФА отличается не более чем на 15% от диагностического уровня реакции, следует признавать сомнительными.

Помимо метода постановки ИФА с применением в качестве твердофазного носителя полистироловых планшетов или стрипов на территории Российской Федерации разрешены к применению тест-системы с использованием в качестве носителя пластиковых гребней, на зубцы которых нанесены специфический антиген и контрольные тест-образцы.

Реакция проводится с ингредиентами, заранее внесенными в ячейки реационной ванны. Результат оценивают по изменению окраски реакционных точек гребня (место нанесения антигена и контрольных антител, показывающих факт прохождения реакции).

Интерпретация результатов анализа

По результатам постановки ИФА в одном диагностическом разведении (скрининг) без определения концентрации антител в испытуемой сыворотке (расчетных формул, калибровочных кривых или титров антител) можно судить только о факте встречи паразита и хозяина. Определение концентрации специфических антител (в титрах, МЕ, АЕ) и ее изменение при раститровке позволяет судить о характере патологического процесса, а также об эффективности специфического лечения.