Занятие № 11. «Цикл трикарбоновых кислот»

Цель занятия: изучить механизм некоторых реакций цикла Кребса.

ВОПРОСЫ К КОНТРОЛЬНОЙ РАБОТЕ:

1. Окислительное декарбоксилирование пирувата как предварительный этап цикла лимонной кислоты. Перечислите витамины и коферменты, задействованные в этом процессе.

2. Реакции цикла лимонной кислоты. Что определяет общее направление реакций в цикле? В какой части клетки протекает этот процесс? Почему?

3. Какие коферменты и витамины участвуют в цикле Кребса? Объясните, как они работают, с указанием конкретных реакций.

4. Расскажите о реакциях цикла Кребса, в результате которых образуются НAДH₂ и ФAДН₂. Какова дальнейшая судьба этих соединений?

5. Функции цикла трикарбоновых кислот. Объясните, какое значение для цикла лимонной кислоты имеют анаплеротические реакции?

6. Энергетический выход цикла трикарбоновых кислот. Сколько молекул ATФ образуется в ходе оборота через цикл одной молекулы лимонной кислоты? Все ли молекулы ATФ, образующиеся при полном окислении активного ацетила, синтезируются путем окислительного фосфорилирования. Как регулируется скорость цикла?

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

Экспериментальная работа.

Опыт 1. Качественное определение пировиноградной кислоты (ПВК).

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Фотоколориметр.

4. Кюветы, 0,5 см.

Реактивы. 1. Клубень картофеля.

2. Яблоко.

3. Гидроксид натрия, 10%-ный раствор.

4. 2,4-динитрофенилгидразин, раствор.

ПВК крови конденсируется с 2,4-динитрофинилгидразином с образованием гидразона, который в щелочной среде дает коричнево-красный цвет раствора. По интенсивности его окраски судят о содержании ПВК.

1. Натрите на терке яблоко. Положите полученную массу в марлю и отожмите сок.

2. Налейте в пробирку 2 мл полученного сока. Добавьте 0,2 мл 2,4-динитрофенилгидразина.

3. Пробирки на 15 мин поместите в темное место при комнатной температуре.

4. Повторите пункт 1-3 с клубнем картофеля.

5. Затем в каждую пробирку внесите по 1 мл 10%-го раствора NаOH и через пять минут оцените цвет раствора.

Запишите и объясните полученные Вами результаты?

Опыт 2. Определение активности дегидраз в семенах.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Водяная баня.

4. Конические колбы, 100 мл.

5. Сухие стаканы 50-100 мл.

Реактивы. 1. Набухшие семена гороха или фасоли.

2. Растительное масло.

3. Метиленовая синь, раствор (50 мг/л воды).

1. Набухшие семена гороха освободите от кожуры и поместите в две колбы по 10 семян в каждую.

2. В первую колбу добавьте 20 мл воды и кипятите 5-10 минут.

3. Затем слейте воду из первой колбы и добавьте в обе колбы по 15 мл раствора метиленовой синей.

4. Семена выдерживайте в этом растворе 10-15 минут.

5. По истечению времени раствор из колб слейте и промойте семена водой.

6. После промывки семена остаются окрашенными в синий цвет. Окрашенные семена перенесите в пробирки и вновь залейте их водой. Для создания анаэробных условий, в пробирки налейте несколько капель подсолнечного масла.

7. Затем пробирки поместите в водяную баню (t = 35-40 ºС)

8. Наблюдая за пробирками, отметьте, семена из какой колбы постепенно теряют синюю окраску, а какие остаются окрашенными.

9. Когда большая часть семян из одной колбы обесцветится, вылейте воду из пробирок и вытряхните семена в сухие стаканы.

10. Через некоторое время (15-30 минут) оцените цвет семян.

Запишите и объясните полученные Вами результаты. Какова функция метиленовой сини в данном эксперименте? На какое соединение эта функция возлагается в живой клетке?

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________