Практическая работа № 8

Тема: «Качественная реакция на пентозы (реакция Фелинга).»

Ход исследования: В пробирку наливают 5 капель гидролизата, нейтрализуют его по лакмусу 10% р-ром едкого натра и проделывают реакцию Фелинга

Реакция Фелинга:

Ход исследования: В пробирку вносят 5-6 капель 1 % р-ра глюкозы или другой исследуемой жидкости, добавляют 3-5 капель реактива Фелинга и нагревают. Появляется желтое окрашивание, затем образуется желтый или кирпично-красный осадок.

Тема: «Определение глюкозы в сыворотке крови глюкозооксидантным методом.»

Биохимический анализатор.

Определение глюкозы в сыворотке крови глюкозооксидантным методом

Отмерить (мл )	Опытная проба	Калибровочная проба	Контрольная проба
Сыворотка крови	0,01
Калибровочный раствор глюкозы		0,01
Вода дист.			0,01
Рабочий раствор	1,00	1,00	1,00

Содержимое пробирок тщательно перемешать и инкубировать в течение 15 минут при температуре 37^о С или в течение 30 минут при комнатной температуре +18-25 ^о С. через 5-10 минут после начала инкубации пробирки интенсивно встряхнуть. После окончания инкубации измерить величину оптической плотности калибровочный и опытных проб против контрольной пробы при длине волны 510 (470-540) нм в кювете с толщиной поглащающего свет слоя 10 или 5 мм. Окраска устойичива в течение 1 часа после окончания инкубации.

Е о

С = ----------- х 10

Е к

Где

С - концентрация глюкозы в опытной пробе, м моль/л.

Ео-оптическая плотность опытной пробы, ед. опт.плотности.

Ек-оптическая плотность калибровочной пробы ед. опт.плотн.

10-концентрация глюкозы в калибровочном растворе , ммол/л.

Практическая работа №9

Тема: « Выделение гликогена из печени и изучение его свойств.»

В печени человека при нормальном питании запасается 80-120 гр гликогена. При голодании в течении суток почти весь запас гликогена расходуется и его не удается обнаружить обычными качетвеными реакциями.

Материал исследования: Печень сытого животного , печень животного после суточного голодания.

Реактивы: трихлоруксусная кислота, 5% р-р ; этиловый спрт; сульфат аммония в порошке; ацитат свинца, 10% р-р; р-р Люголя; физ.р-р.

Оборудование: Аптечные весы и разновес; штативы с пробирками; воронки; стеклянные палочки; бумажные фильтры; ступки; химический стакан; газовые горелки.

Ход работы:

1. Печень забитых животных быстро извлекают, разрезают на тонкие пласты и опускают в стаканы с кипящим физ. р-ом для инактивации фермента фосфорилазы гликогена. Через 10-15 мин печень извлекают из р-ра. Далее исследование печени сытого и голодавшего животного проводится отдельно.

2. Отвешивают на весах 0.5 гр печени, помещают в ступку, заливают тремя мл 5% р-ра ТХУ и растирают пестиком в течении 10 мин. Затем прибавляют 3 мл дист воды, суспензию перемешивают и фильтруют через смоченный водой бумажный фильтр в чистую пробирку.

3. С полученными фильтратами выполняют качественные реакции на гликоген.

А) В одну пробирку наливают 1 мл дист воды, во вторую и третью –по 1 мл фильтратов. После этого в каждую пробирку наливают по 1-2 капли р-ра Люголя и сравнивают окраску.

Б) В 3 пробирки наливают по 10 капель фильтрата, полученного из печени сытого животного, и проделывают реакции осаждения. Для этого в первую приливают 10 капель этилового спирта, во вторую 10 капель 10% ацитата свинца, в 3 насыпают порошок сульфата аммония до полного насыщения.

Оформление работы: Внесите результаты в таблицу; сравните результаты.

Препарат	Спирт	Р-р ацитата свинца	Сульфат аммония
Печень сытого животного Печень голодавшего животного Выводы

Тема: «Определение сиаловых кислот.»

1. Реакция с уксусносернокислотным реактивом.

Ход исследования: В пробирку наливают 5 капель слюны и 20 капель уксусносернокислотного реактива. Хорошо встряхнув, пробирку помещают на 30 мин в кипящую водяную баню, после чего наблюдают оюразование буровато-розового окрашивания.

2. Реакция с дифениламином.

Ход исследования: В пробирку наливают 5 капель слюны, 20 капель дифениламиноваго реактива. После встряхивания помещают пробирку на 30 мин в кипящую водяную баню. Содержимое окрашивается в сине-фиолетовый цвет.