А сыворотка крови - а бланк

Глюкоза моль/л = --------------------------- х С кал

А кал - А бланк

С кал = концентрация стандарта калибратора

Нормальные величины:

Глюкоза ммоль/л

Дети: От рождения до 1 месяца - 1,7-4,4, 2 месяца - 3,3,-5,8

Взрослые: сыворотка плазма - 4,2-6,0

Капилярная кровь - 3,9-5,6, Моча (моль/ 24 часа ) - 0,0-1,7

Практическая работа №11

Тема: «Определение свободных жирных кислот в сыворотке крови.»

В крови содержание свободных жирных кислот 640 – 880 мкмоль/л.

Принцип метода. Медные соли жирных кислот способны образовывать с диэтилдитиокарбаматом натрия окрашенные комплексные соединения, интенсивность окраски которых пропорциональна концентрации свободных жирных кислот.

Ход работы. В опытную пробирку вносят 0,5 мл сыворотки крови, затем приливают 5 мл хлороформа и добавляют 2,5 мл медного реактива. Контрольную пробу готовят параллельно: к 5 мл хлороформа добавляют 2,5 мл медного реактива. Пробирки закрывают пробками и встряхивают в течении 3 мин. Содержимое переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют при 3000 об/мин в течении 15 мин. Смесь в пробирках разделяется на три слоя: хлороформ, белок и вода. Верхнюю водную фазу, содержащую избыток медного реактива, удаляют, белковую пленку сдвигают на стенки пробирок, а хлороформный слой переносят в пробирки. К хлороформному слою с экстрагированными в нем жирными кислотами добавляют 0,5 мл 0,1  диэтилдитиокарбаната натрия в бутаноле и перемешивают содержимое пробирок. Опытную пробу колориметрируют на ФЭК с синим светофильтром в кюветах на 5 мл против контрольной пробы. Содержимое свободных жирных кислот рассчитывают по калибровочному графику.

Клинино-диагностическое значение. Концентрация свободныхнеэстерифицированных жирных кислот в сыворотке крови увеличивается при сахарном диабете, после введения адреналина, при голодании, поскольку идет мобилизация жира из жирового депо, и свободные жирные кислоты транспортируются в комплексе с альбуминами. Уменьшается содержание свободных жирных кислот в сыворотке крови после введения инсулина и глюкозы.

Тема: «Количественное определение активности липазы в присутствии желчи.»

Об активности фермента липазы судят по количеству жирных кислот, образовавшихся за определенный промежуток времени в результате гидролиза триглицеридов.

Ход работы: В 2 узких стаканчика отмеривают по 5 мл прокипяченного молока и по 2 мл вытяжки из поджелудочной железы. Затем в 1 стаканчик добавляют2 мл 5% р-ра желчи , а во в торой- 2мл дист воды. После перемешивания жидкости из каждого стаканчмка в колбочке отбирают пробы по 1 мл, а стаканчики помещают в водяную баню ( 38-40 С). К пробам добавляют по 2 капли 0.1 % спиртового р-ра фенолфталииина и по 3 мл дист воды, а затем жидкости титруют 0.05 н. р-ом едкого натра до розовой окраски. Последующие пробы по 1 мл жидкости из стаканчиков берут через 15, 30, 45 и 60 мин и ,добавив по 2 капли р-ра фенолфталиина и по 3 мл дист воды, титруют тем же р-ом едкого натра до розовой окраски в жидкости в колбочках. Кол-во мл 0.05 н р-ра едкого натра, израсходованного на титрование каждой пробы, записывают в таблицу, а затем наносят на график и вычерчивают кривые, характеризующие активность фермента липазы.

Номер пробы	Время взятия пробы	Кол-во мл 0.05 н р-ра едкого натра, израсходованного на титрование Стаканчик№1 Стаканчик№2
1 2 3 4 5	До начала гидролиза Через 15 мин 30 мин 45мин 60 мин