Задания:
1. Предложить действия лабораторного техника в данной ситуации, перечислить правила сбора мочи для анализа.
2. Перечислить методы определения глюкозы в моче.
3. Назвать правила дезинфекции счетной камеры Горяева.
4. Определить белок в моче с пирогаллоловым красным.
№ 12.
1. Необходимо повторить исследование, проинструктировав пациента как правильно собрать мочу для анализа. Пациента необходимо предупредить, чтобы банка для сбора мочи была тщательно вымыта и высушена, как и крышка. Должна быть собрана первая утренняя моча, после тщательного туалета наружных половых органов, доставлена в лабораторию как можно быстрее.
2. Качественное определение глюкозы в моче можно провести с помощью пробы Гайнеса-Акимова и с помощью индикаторной тест-полоски. Количество глюкозы в моче определяют на мочевом анализаторе и глюкозооксидатным методом.
Глюкозооксидаза катализирует перенос двух водородных атомов с первого углеродного атома глюкозы на кислород, растворенный в жидком реагенте. При этом в ходе реакции образуется в эквимолярных количествах перекись водорода. Т.е. концентрация образовавшейся перекиси водорода точно равна определяемой концентрации глюкозы. Следовательно, использование глюкозооксидазной реакции, трансформировало задачу определения концентрации глюкозы в задачу определения концентрации перекиси водорода, которая значительно проще первой. И здесь есть несколько способов, широко используемых сегодня в лабораторной практике
фотометрический биохимический метод- в котором молекулы перекиси водорода под действием фермента пероксидазы расщепляются с образованием активной формы кислорода – супероксид анион-радикала – О2-, который в свою очередь окисляет хромоген, что приводит к значительному изменению спектра поглощения хромогена.
( изменение оптической плотности конечной реакции на длине волны 480-520 нм пропорционально концентрации глюкозы, содержащейся в пробе.)
Гексокиназный метод
Гексокиназный
метод состоит из двух последовательных
реакций, но совершенно других:
Регистрация осуществляется при длине волны 340 нм по светопоглощению НАДН. Этот метод является высокоспецифичным и не дает реакции с другими компонентами сыворотки крови. Гексокиназный метод считается референтным для определения глюкозы.
3. Алгоритм № 1.
4. Камеру дезинфицируют погружением в 6% перекись водорода на 1 час, затем промывают проточной водой, протирают насухо чистой тканью.
Алгоритм № 1. Определение белка в моче с пирогаллоловым красным.
Оснащение: дезраствор, одноразовые перчатки, бланки анализа мочи, пробирки, пипетки или дозаторы, колориметр (ФЭК или спектрофотометр, «Белур» и т.п.), исследуемый материал
Реактивы: пирогаллоловый красный, дистиллированная вода
Определение белка в моче пирогаллоловым методом на анализаторе «Белур-600»
Прибор предварительно калибруется преподавателем; таким образом, в памяти анализатора сохраняется фактор пересчета оптической плотности в концентрацию белка;
Подготовка опытной пробы:
мутную мочу предварительно центрифугируют 10 мин при 1500 об/ мин;
смешать в пробирке 20 мкл мочи и 1 мл реагента;
инкубировать пробу 10 мин при комнатной температуре; окраска проб стабильна 60 минут по истечении времени инкубации;
перед измерением пробу необходимо еще раз перемешать, перелить в оптическую кювету;
отодвинуть шторку кюветодержателя на анализаторе, вставить кювету (прозрачные стенки кюветы должны располагаться по ходу светового луча);
измерение концентрации белка происходит автоматически, показатель высвечивается на табло (при концентрации до 1 г/л - в г/мкл; при концентрации белка более 1 г/л – в г/л).
-------------------------------------------------------------------------------------
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
№ 13.
Ситуационная задача.
При микроскопическом исследовании препарата из волос обнаружено: пораженные волосы окутаны чехликом из мелких спор диаметром 1-3 мкм, расположенных мозаично, кучками, тесно прилегающих друг к другу. При надавливании на покровное стекло чехол разрушается и внутри волоса можно видеть септированные нити мицелия и кучки мелких спор.