Задания:

1. Оценить результат с позиции «норма» - «патология», назвать возбудителя данного заболевания.

2. Перечислить этапы лабораторной диагностики микозов и правила уничтожения материала после исследования.

3. Назвать правила обработки лабораторной посуды.

4. Подготовить мочу для микроскопического исследования осадка.

№ 14.

1. Обнаружены споры гриба Подобную микроскопическую картину волоса дает заболевание – парша (фавус).

Возбудителем парши является Трихофитон Шенлейна.

Классификация микозов:

а) кератомикозы;

б) дерматомикозы;

в) кандидамикозы;

г) глубокие микозы.

2. Этапы лабораторной диагностики микозов:

а) обнаружение возбудителя (микроскопия патологического материала);

б) выделение возбудителя (посевы на питательную среду);

в) идентификация возбудителя по выросшим колониям;

г) изучение ответной реакции макроорганизма по серологическим, иммунологи­ческим, реакциям, а также гистологические исследования и экспериментальное заражение животных.

После исследования материал из кожи, ногтей и волос, а также бумага, в которую был упакован материал, сжигают.

3.Алгоритм № 2.

4.Дезинфекцию посуды осуществляют погружением в 3% раствор хлорамина, осветленной хлорной извести в течение 30 минут или 1% раствора хлорамина и хлорной извести в течение 60 минут. Лабораторную посуду кипятят в р-ре моющих средств в течение 15 минут, промывают, ополаскивают, высушивают

Алгоритм № 2. Приготовление мочи для ориентировочного микроскопического исследования.

Оснащение: дезраствор, одноразовые перчатки, бланки анализа мочи, пробирки, пипетки, предметные и покровные стекла, центрифуга, микроскопы, исследуемый материал

Алгоритм действий:

• 10 мл мочи центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин;

• Сливают надосадочную жидкость через край резким, но аккуратным движением, не вытряхивая осадок;

• Небольшую каплю осадка аккуратно вытряхивают на центр предметного стекла;

• Накрывают каплю покровным стеклом, не допуская выхода капли за его пределы;

• Устанавливают предметное стекло на предметный столик микроскопа;

• Рассматривают осадок сначала на малом увеличении (х8, х10), затем на большом (х40)

-----------------------------------------------------------------------------------------------------------

№ 15.

Ситуационная задача.

При исследовании ликвора на цитоз был получен следующий результат: цитоз составляет 20*10⁶ /л.

Задания:

1. Оценить данную ситуацию с позиции «норма» - «патология» и аргументировать свою оценку.

2. Назвать правила определения цитоза в ликворе.

3. Перечислить правила санэпидрежима при работе с мокротой.

4. Провести пробу Зимницкого.

№ 15.

1. Нормальный показатель цитоза взрослого человека: 0 - 1 -5* 10⁶ /л.

Результат оценивается как плеоцитоз - увеличение числа клеточных элементов ЦСЖ. Значительный плеоцитоз наблюдается при гнойных воспалениях оболочек мозга, абсцессе мозга. Менее выраженный плеоцитоз - при туберкулезном менингите, энцефалитах, полиомиелите, а также опухолях мозга, травмах, кровоизлияниях, цистицеркозе.

2. Исследование ЦСЖ начинают с определения цитоза (количества лейкоцитов в ЦСЖ), т.к. они могут быстро разрушиться. Для облегчения подсчета цитоза необходимо разрушить эритроциты и подкрасить лейкоциты. Для этого используют 10% уксусную кислоту, подкрашенную метилвиолетом (0,5г на 5 мл кислоты) или реактив Самсона (ледяная уксусная кислота -30 мл, карболовая кислота - 2 мл, спиртовой раствор фуксина 1:10 - 2 мл, дистиллированная вода - до 100 мл). Подсчет лейкоцитов производят в счетной камере Фукса-Розенталя.

Спинномозговая жидкость (ликвор) образуется в сосудистых сплетениях желудочков головного мозга. У взрослого человека одновременно в субархноидальных пространствах и в желудочках мозга циркулирует 110–160 мл ликвора, в спинномозговом канале — 50–70 мл. Ликвор образуется непрерывно со скоростью 0,2–0,8 мл/мин, что зависит от внутричерепного давления. В сутки у здорового человека образуется 350–1150 мл спинномозговой жидкости.

Ликвор получают путем пункции спинномозгового канала, чаще – люмбальной. Первые его капли удаляют (“путевая” кровь). Затем ликвор собирают как минимум в 2 пробирки: в обычную пробирку (химическую, центрифужную) для общеклинического и химического анализа, в стерильную – для бактериологического исследования.

Следует помнить, что доставляемые в лабораторию образцы ликвора должны быть защищены от пергревания или охлажения, а образцы, предназначенные для выявления бактериальных полисахаридов в серогических тестах, следует прогревать на водяной бане в течение 3 мин.

Собственно лабораторное исследование ликвора (аналитический этап включает в себя следующие этапы:

- макроскопический анализ - оценка физико-химических свойств (объем, цвет, характер), - подсчет количества клеток, - микроскопия нативного препарата и цитологическое исследование окрашенного препарата; - биохимическое исследование,(альбумин, глюкоза, лактат,хлориды….) - микробиологическое исследование (по показаниям).

Нормальная СМЖ бесцветна и порозрачна (как дистиллированная вода, по сравнению с которой и описывают обычно физические свойства ликвора).

Сероватый или серо-зеленый цвет ликвора обычно обусловлен примесью микробов и лейкоцитов. Красный цвет СМЖ различной интенсивности (эритрохромия) обусловлен примесью эритроцитов, встречающихся при свежих кровоизлияниях или травме мозга. Визуально пристутствие эритроцитов обнаруживается при их содержании более 500-600 в мкл.

При патологических процессах жидкость может быть ксантохромной – окрашенной в желтый или желто-коричневый цвет продуктами распада гемоглобина. Необходимо помнить и о ложной ксантохромии – окраске ликвора, вызванной лекарственными препаратами. Реже мы встречаем зеленоватый цвет СМЖ (гнойный менингит, абсцесс мозга). В литературе описан и корчневый цвет ликвора – при прорыве кисты краниофарингиомы в ликворные пути.

Мутность ликвора может быть обусловлена примесью клеток крови или микроорганизмов. В последнем случае мутность можно удалить центрифугированием. При содержании в СМЖ повышенного количества грубодисперсных белков она становится опалесцирующей.

Относительная плотность спинномозговой жидкости, полученной при люмбальной пункции, 1,006–1,007. При воспалении мозговых оболочек, травмах головного мозга относительная плотность спинномозговой жидкости возрастает до 1,015. Уменьшается она при гиперпродукции спинномозговой жидкости (гидроцефалия).

При повышенном содержании в ликворе фибриногена происходит образование фибринозной пленки или сгустка, что наблюдается чаще при туберкулезном менингите. Иногда пробирку с жидкостью оставляют при комнатной температуре на сутки (если необходимо точно установить – образовалась ли пленка?). При наличии фибринозной пленки ее переносят препаровальной иглой на предметное стекло и окрашивают по Цилю-Нильсену или другим методом, для выявления микобактерий. Нормальная СМЖ на 98-99% состоит из воды.

Тем не менее исследование ее химического состава представляет собой важную задачу. Оно включает определение уровня белка, глюкозы и хлоридов, а в ряде случаев дополняется другими показателями.

Камера Фукса - Розенталя предназначена для подсчета форменных элементов спинно-мозговой жидкости в КДЛ и ЛПУ. В комплект входят 5 предметных стекол, 1 футляр. Камеры состоят из толстого предметного стекла с нанесенными на них поперечными прорезями, образующими три поперечно расположенные плоские площадки. Средняя площадка продольной прорезью разделена на две, каждая из которых имеет выгравированную на ней сетку. Постоянной величиной во всех сетках является так называемый «малый квадрат», сторона которого равна 1/20 мм, следовательно, его площадь равна 1/400 мм2. Большие квадраты сетки Фукс-Розенталя не разграфлены, сгруппированы по 16 квадратов, причем каждая такая группа ограничена тройными линиями. Формула для подсчета форменных элементов спинно-мозговой жидкости в камере Фукс-Розенталя при степени разведения 10/11 -   x = (а · 11) / (3,2 · 10) ≈ a / 3 , где x — количество форменных элементов в 1 мм3; а — количество форменных элементов, подсчитанных в одной камере.

3. Алгоритм № 9.

4. Работать необходимо в средствах индивидуальной защиты в вытяжном шкафу. Весь металлический инструментарий дезинфицируется обжиганием. Все инструменты и мокрота обеззараживаются хлорсодержащими препаратами в течении часа.

Алгоритм № 9. Проба Зимницкого.

Оснащение: дезраствор, одноразовые перчатки, бланки пробы по Зимницкому, цилиндры, урометры, исследуемый материал

Алгоритм действий:

• Полученные от пациента емкости расположить по порядку;

• Измерить объем каждой порции с помощью мерного цилиндра:

• мочу наливают в мерный цилиндр и по нижнему мениску, исходя из цены деления, считываем показания объема

• Рассчитать дневной, ночной и суточный диурез;

• Измерить относительную плотность каждой порции с помощью урометра:

• наливают в мерный цилиндр 50 мл мочи, не допуская образования пены, и в нее опускают урометр, следя, чтобы он не опустился на дно и не прилипал к стенкам; снимают показания со шкалы урометра по нижнему мениску.

• Результаты занести в бланк анализа

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------

№ 16.

Ситуационная задача.

При исследовании кала на скрытую кровь бензидиновая проба оказалась положитель­ной. Выяснено, что пациент находился на смешанной мясо-молочно-растительной диете.

Задания.

1. Перечислить правила сбора кала на скрытую кровь.

2. Назвать пробы, которые используют при этом анализе, клинико-диагностическое значение исследования кала на скрытую кровь.

3.Подготовить нативный препарат мокроты для микроскопического исследования.

4. Перечислить правила обработки кала.

№ 16.

1. Пациента необходимо предупредить, чтобы он в течение 3-5 дней до анализа исключил из диеты мясо, рыбу, яйца, так как миоглобин этих продуктов дает ложноположительную реакцию на "скрытую кровь". Кроме того, пациент не должен употреблять растительную пищу, поскольку пероксидаза зеленых растений дает ложноположительную реакцию. Нельзя также принимать препараты железа, чистить зубы щеткой, чтобы механические повреждения десен не спровоцировали поступление крови в кишечник.

Кал для исследования собирают после самопроизвольной дефекации в чистую, сухую банку с широким горлом.

2. "Скрытую кровь" можно выявить с помощью амидопириновой пробы, бензидиновой пробы (проба Грегерсена), азопирамовой пробы и с помощью экспресс тестов. Нельзя исследовать кал, загрязненный мочой, менструальной кровью, после приема касторового или вазелинового масла, применения свечей и клизм.

Выявление "скрытой крови" позволяет предположить незначительные кровотечения при язвах желудочно-кишечного тракта.

3.Алгоритм № 7.

4.Кал собирают в закрытую маркированную емкость с делениями, до отметки - 1 литр, доливают воду и засыпают сухой хлорной известью, известью белильной термостойкой, нейтральным гипохлоритом Са из расчета 1:5 на 1 час.

Кал, в котором обнаружены яйца гельминтов, обеззараживают 20% хлорной известью в течение 2-х часов. Лабораторную посуду (склянки, колбы, предметные стекла, стеклянные палочки, т.д.) обеззараживают 10% р-ром хлорной извести в течение 2-х часов, 20% р-ром хлорной извести 60 мин. или кипят в 2% р-ре моющих средств в течение 15 минут с момента закипания.

Алгоритм № 7. Приготовление препарата мокроты для микроскопического исследования.

1. Мокроту, помещенную в чашку Петри, рассматривают на черном и белом фоне.

2. Узким шпателем и иглой (можно пользоваться деревян­ными лучинами) выбирают различные составные части мокроты (комочки гноя, слизи, крови, тканевые клочки).

3. Отоб­ранный материал помещают на предметное стекло. При этом более плотные по консистенции частицы помещают ближе к центру намечаемого препарата, а менее плотные, так же как и слизисто-гнойные, гнойно-слизистые, кровя­нисто окрашенные образования, — по периферии.

4. Мате­риал накрывают покровным стеклом. Количество материа­ла, взятого для одного препарата, должно быть таково, чтобы мокрота не выходила за пределы покровного стекла.

5. Если мокрота имеет вяз­кую или тягучую консистенцию, то на покровное стекло слегка надав­ливают, чтобы материал распределился равномерно тонким слоем.

6. Препараты сначала просматривают под малым увеличением (объ­ектив 8, окуляр 7), затем под большим (объектив 40, окуляр 7) увели­чением микроскопа.

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

№ 17.

Ситуационная задача.

При исследовании отделяемого влагалища выявлено: выделения имеют "рыбный" запах, который усиливается при добавлении 10% раствора KOH. При микроскопии - в мазках обильная грамвариабельная кокко-бациллярная флора и "ключевые клетки", рН отделяемого больше 5,0. Полное отсутствие молочнокислых бактерий.

Задания:

1. Оценить данную ситуацию с позиции «норма» - «патология» и аргументировать свою оценку.

2. Назовите биологический материал, который исследуется при подозрении на ЗППП.

3. Подготовить препараты кала для микроскопического исследования.

4. Перечислить правила санэпидрежима при работе с мочей.

№ 17.

1. Можно предположить бактериальный вагиноз, который ставится при наличии перечисленных признаках. "Ключевая клетка"- это клетка плоского эпителия, сплошь покрытая как "песком" кокко-бациллярной флорой.

2. У женщин исследуют отделяемое канала шейки матки, уретры и верхнебокового свода влагалища. У мужчин - выделения из уретры. У женщин и мужчин смывы из прямой кишки.

3. Алгоритм № 6.

4. Остатки мочи и использованные пробы сливают в промаркированную емкость с делениями и засыпают сухой хлорной известью, нейтральным гипохлоритом кальция из расчета 1:5 на 1 час. После дезинфекции мочу сливают в канализацию.

Дезинфекцию посуды осуществляют погружением в 3% раствор хлорамина, осветленной хлорной извести в течении 30 минут или 1% раствора хлорамина и хлорной извести в течение 60 минут. Лабораторную посуду кипятят в р-ре моющих средств в течение 15 минут, промывают, ополаскивают, высушивают.

Алгоритм № 6. Приготовление препаратов кала для микроскопического исследования.

А) Нативный препарат

В этом препарате дифференцируют остатки не переваренной белковой пищи - соединительную ткань, мышечные волокна с исчерченностью и без исчерченности, остатки не переваренной углеводной пищи (переваренную клетчатку), остатки нерасщепленного и расщепленного жира - капли, иглы, глыбки, слизь и заключенные в ней лейкоциты, эритроциты, цилиндрический эпителий, яйца гельминтов, цисты простейших и вегетативные особи.

Оснащение: дезраствор, одноразовые перчатки, бланк анализа кала, пробирки, предметные стекла, покровные стекла, стеклянные палочки, исследуемый материал

Реактивы: физиологический раствор

Алгоритм действий:

1. Приготовить густую каловую эмульсию (смешать в пробирке 2 капли физ.раствора и небольшой комочек кала)

2. Нанести стеклянной палочкой на предметное стекло 1 каплю каловой эмульсии

3. Накрыть покровным стеклом

4. Микроскопировать

Б) Препарат с Люголем

Этот препарат предназначен для выявления крахмальных зёрен и йодофильной флоры.

Оснащение: дезраствор, одноразовые перчатки, бланк анализа кала, пробирки, предметные стекла, покровные стекла, стеклянные палочки, исследуемый материал

Реактивы: раствор Люголя

Алгоритм действий:

1. Нанести стеклянной палочкой на предметное стекло 1 каплю каловой эмульсии

2. Добавить 1 каплю раствора Люголя и перемешать с каловой эмульсией

3. Накрыть покровным стеклом

4. Микроскопировать: не переваренный крахмал окрашивается в черный или темно-синий цвет, переваренный крахмал окрашивается в фиолетовый, синий или голубой цвет, йодофильная флора окрашивается в черный или коричневый цвет.

В) Препарат с метиленовым синим

Этот препарат предназначен для дифференцировки капель нейтрального жира от капель жирных кислот.

Оснащение: дезраствор, одноразовые перчатки, бланк анализа кала, пробирки, предметные стекла, покровные стекла, стеклянные палочки, исследуемый материал

Реактивы: раствор метиленового синего

Алгоритм действий:

1. Нанести стеклянной палочкой на предметное стекло 1 каплю каловой эмульсии

2. Добавить 1 каплю раствора метиленового синего и перемешать с каловой эмульсией

3. Накрыть покровным стеклом

4. Микроскопировать: капли жирных кислот окрашиваются метиленовой синью в интенсивно синий цвет, а капли нейтрального жира остаются бесцветными

Г) Препарат с 50% раствором глицерина.

Препарат предназначен для выявления яиц гельминтов.

Оснащение: дезраствор, одноразовые перчатки, бланк анализа кала, пробирки, предметные стекла, покровные стекла, стеклянные палочки, исследуемый материал

Реактивы: 50% раствор глицерина

Алгоритм действий:

1. Нанести стеклянной палочкой на предметное стекло 1 каплю каловой эмульсии

2. Добавить 1 каплю раствора 50% раствора глицерина и перемешать с каловой эмульсией

3. Накрыть покровным стеклом

4. Микроскопировать: глицерин просветляет детрит и предохраняет препарат от высыхания, что способствует лучшему выявлению яиц гельминтов.

-----------------------------------------------------------------------------------------

№ 18.

Ситуационная задача.

В лабораторию доставлена выпотная жидкость из плевральной полости в количестве 200 мл. Цвет лимонно-желтый, прозрачность полная, характер серозный, без запаха, относительная плотность 1,010. Белок - 10 г/л.