Бактеріологічний метод

Досліджуваний матеріал	Середовища для первинного посіву	Культуральні властивості збудника	Ідентифікація чистої культури						Вид та фаготип збудника
			Морфологія (малюнок), тикторіальні властивості	Біохімічні властивості			Антигенна структура (слайд-аглютинація)
				Ферментація глюкози	Ферментація лактози	Утворення Н2S	з О-сироватками	з Н-сироватками

Висновок (Дайте відповіді на питання задачі 1).

Задача 2. У інфекційну лікарню поступив хворий з попереднім діагнозом ”черевний тиф?”. Пацієнт хворіє 10 днів. Лікар направив кров пацієнта на серологічне дослідження. Бактеріолог поставив реакцію Відаля. За результатами демонстрації посніть отримані результати та дайте відповідь лікарю про результати досліджень. Оформіть протокол дослідження. Який ще матеріал від хворого лікар направив на дослідження?

Методика.

Серологічний метод

Серологічне дослідження крові проводиться з метою діагностики захворювання, контролю за реконвалісцентами та виявлення бактеріоносіїв.

Реакцію Відаля⁹¹⁰ ставлять з метою виявлення у сироватці крові хворих аглютинінів, які з‘являються у кінці першого - на початку другого тижня захворювання. Реакцію ставлять одночасно з О-, Н-черевнотифозними та А-, В-паратифозними діагностикумами. Монодіагностикуми використовують для з‘ясування стадії захворювання, бо вміст О- та Н-антитіл неоднаковий у різні періоди захворювання. Антитіла до О-антигену з‘являються на 1-му тижні захворювання, накопичуються у розпал захворювання та швидко зникають на момент видужання. Антитіла до Н-антигену з‘являються в розпал захворювання, накопичуються у кінці захворювання та зберігаються у високих титрах після видужання хворого протягом тривалого часу.

Для постановки реакції Відаля необхідні: антитіла (сироватка крові хворого), антигени

(О9-, Нd-черевнотифозні, О2-, О4-, На-, Hb-паратифозні монодіагностикуми) та 0,85% розчин хлориду натрію (електроліт).

Для отримання сироватки у хворого взяти 3-4мл крові з ліктьової вени (у дитини 1мл з пальця чи мочки вуха). Пробірку з кров‘ю поставити у термостат при t=37°С на 10-15 хвилин для згортання крові. Згусток, що утворився, відділити від стінок пробірки за допомогою пастерівської піпетки і поставити у холодильник на 30-40 хвилин для кращої рефракції згустку і більш повного відділення сироватки. Сироватку відсмоктати і зробити її робочий титр 1:50. Потім у шести рядах аглютинаційних пробірок сироватки протитрувати від 1:100 до 1:1600 шляхом послідовного перенесення 1мл рідини з попередньої пробірки у наступну пробірку ряду. З останньої пробірки 1мл протитрованої сироватки видалити для отримання однакового об‘єму в усіх пробірках (табл.3).

Таблиця 3

Схема постановки реакції Відаля

Компоненти	Номери пробірок
	1	2	3	4	5	6 (Кс)	7(Кд)
0,85% розчин хлориду натрію, мл	1	1	1	1	1	1	1
Сироватка хворого в розведенні 1:50, мл	1→	1→	1→	1→	1↓	1	─
Одержане розведення сироватки	1:100	1:200	1:400	1:800	1:1600	1:100	─
Діагностикум, краплі	2	2	2	2	2	─	2
Інкубація у термостаті при 37°С – 2 год.; 18°С – 18 год.
Облік реакції

Умовні позначки: Кс – контроль сироватки, Кд – контроль діагностикуму.

У кожну пробірку ряду, окрім шостої (контроль сироватки) добавити по 2 краплі діагностикуму. Сьома пробірка є контролем діагностикуму і містить 1мл фізрозчину та 2 краплі діагностикуму. Штатив з пробірками струсити і поставити у термостат на 2 години, після чого зробити попередній облік результатів реакції. Остаточний облік реакції провести через 18-20 годин (пробірки з реакцією Відаля залишити при кімнатній температурі). При позитивній реакції аглютинації утворюється аглютинат білого кольору з більш-менш прозорою рідиною над ним. При негативній реакції рідина залишається каламутною. Облік реакції Відаля провести, оцінюючи послідовно кожну пробірку, починаючи з контрольних. За титр сироватки приймають найвищий її титр, в якому відбулось утворення аглютинату. Роблячи облік результатів звернути увагу на характер аглютинатів: О-аглютинація буде дрібнозернистою, а Н-аглютинація – крупнозернистою.

При черевному тифі діагностичним титром антитіл реакції Відаля є титр 1:200.

У людей, які вакциновані проти черевного тифу та паратифів, також спостерігається позитивна реакція Відаля з високим титром антитіл, тому "інфекційний Відаль" відрізняється від "щеплювального" тільки по зростанню титру аглютинінів у сироватці хворого.

5.2.Засвоїти мету та сутність дослідження сироватки крові хворого за допомогою реакції Відаля. Результати вивчення демонстрації занести у протокол дослідження

Ретельно вивчити демонстрацію: з‘ясувати у яких пробірках та з якими діагностикумами утворився аглютинат. Визначити максимальні титри сироваток хворого з аглютинатом – це і буде результатом дослідження. Звернути увагу на те, що результат демонстрації свідчить: найвищий титр імуноглобулінів у сироватці хворого з черевнотифозним О9-діагностикумом склав 1:1600 та з Нd-діагностикумом – 1:200. Отриманий результат серологічного дослідження відповідає періоду розпалу захворювання. Підсумувати отримані результати мікробіологічних досліджень та запам‘ятати – титр імуноглобулінів у сироватці крові пацієнта 1:200 та > з О9-монодіагностикумом за умов виділення збудника з крові, фекалій, сечі або жовчі є підставою для постановки хворому діагнозу "черевний тиф".

ПРОТОКОЛ ДОСЛІДЖЕННЯ

Мета …….