Совместная работа студента с преподавателем

Самостоятельная работа студентами выполняется под непосредственным контролем преподавателя. После выполнения задания студенты должны представить тетради на проверку преподавателю.

Контрольные вопросы

• Почему практическое применение генотипических методов для оценки антибиотикочувствительности в настоящее время ограничено?

• В чем выражается антибактериальная активность?

• Что является главным показателем антибиотикочувствительности независимо от метода определения?

• В чем заключается принцип метода серийных разведений?

• Почему в некоторых случаях содержания антибиотика необходимо контролировать одновременно как стандартными, так и специальными методами?

Лабораторная работа № 9-10

Первичное выделение антибиотиков из культуральной жидкости и их очистка.

Тема занятия: Первичное выделение антибиотиков из культуральной жидкости и их очистка.

Цель: Освоить технику отделения нерастворимых веществ различными способами и освоить методы выделения антибиотиков из культуральной жидкости

Задачи обучения:

• Знать принципиальную технологическую схему получения целевых продуктов биотехнологическим способом.

• Знать основные операции и манипуляции для отделения нерастворимых веществ из культуральной жидкости (фильтрование, центрифугирование, седиментация, отстаивание).

• Знать основные группы ценных веществ, накапливаемые в культуральной жидкости.

• Знать основные группы ценных веществ, накапливаемых внутриклеточно.

• Знать методы (экстракция, сорбция, осаждение) и способы выделения целевых продуктов из концентрата культуральной жидкости.

• Знать основные методы и способы первичной и окончательной очистки антибиотиков.

ЗАДАНИЕ 1 (занятие № 9). Отделить нерастворимую фазу от культуральной жидкости (из заранее подготовленных суспензий актиномицетов) и получить хлороформный экстракт антибиотиков.

Методика выполнения работы. Многие антибиотики хорошо растворяются в органических растворителях. Их извлекают из нативного водного раствора экстракцией органическим растворителем, не смешивающимся с водой (хлороформ, этилацетат, бутан), с использованием делительных воронок. В частности, пенициллин (при кислом значении рН) экстрагируют из подкисленного нативного раствора в хлороформ в соотношении сначала 1:2, затем 1:3 и 1:5. Отделенные на делительной воронке хлороформные слои объединяют, затем антибиотики реэкстрагируют из хлороформа в щелочную воду. Применение многостадийной экстракции обеспечивает как концентрирование, так и очистку выделяемых веществ, однако при этом требуются большие объемы органических растворителей.

ЗАДАНИЕ 2 (занятие № 10). Провести очистку антибиотиков методом сорбции

Методика выполнения работы. Антибиотики с выраженными основными свойствами (аминогликозиды, пенициллины)) легко сорбируются на ионообменные смолы (катиониты) и затем вытесняются водным раствором минеральной кислоты. Промыть несколько раз дистиллированной водой стеклянную колонку, заполненную катионитной ионообменной смолой, и пропустить через нее щелочной раствор антибиотиков. Десорбцию антибиотиков провести сначала концентрированной, затем разведенной соляной кислотой. Элюат собрать, охладить в холодильнике и отделить выпавшие кристаллы антибиотика фильтрованием через стеклянную воронку.