Информационно-дидактический блок

Основные признаки идентификации отдельных классов и видов микроорганизмов

Специфические особенности микроорганизмов определили набор тех признаков и свойств, которые используются для их систематизации, классификации и идентификации.

1. Морфологические признаки – величина, форма, характер взаиморасположения.

2. Тинкториальные свойства – способность окрашиваться различными красителями. особенно важным признаком является отношение к окраске по Грамму, которое зависит от структуры и химического состава клеточной стенки бактерий. Морфологические свойства и отношение к окраске по Грамму определяют принадлежность к крупным таксонам - роду, семейству и т.п.

3. Культуральные свойства – особенности роста бактерий на жидких (образование пленки, осадок, помутнение) и плотных (форма, размер, консистенция, края, поверхность, прозрачность колоний, образование пигмента и другие свойства) питательных средах.

4. Спорообразование – форма и характер расположения споры в клетке.

5. Физиологические свойства – способы углеродного (аутотрофы, гетеротрофы), азотного (аминотрофы, аминогетеротрофы) питания; тип дыхания (аэробы, факультативные анаэробы, строгие анаэробы, микроаэрофилы).

6. Биохимические свойства – способность ферментировать различные углеводы, протеолитическая активность, образование индола, НS₂, наличие уреазы и других ферментов и т.д.

7. Химический состав клеточных стенок – содержание и состав основных сахаров и аминокислот.

8. Липидный и жирнокислотный состав – изучение состава жирных кислот проводят с помощью газовой хроматографии, которая обладает высокой разделительной способностью и чувствительностью.

Под колонией принято понимать видимую простым глазом изолированную структуру, образующуюся в результате размножения и накопления бактерий за определенный срок инкубации. Колония образуется обычно из одной родительской клетки или из нескольких идентичных клеток. Поэтому пересевом изолированной колонии может быть получена чистая культура микроорганизма.

Под культурой понимают всю совокупность бактерий, выросших на плотной или жидкой питательной среде. Как колония, так и чистая культура каждого вида характеризуется определенными признаками.

Основной и главный принцип бактериологии – во избежание ошибок изучать свойства только чистых, однородных культур.

Каждая выделенная культура данного вида бактерий называется также штаммом, то есть конкретным образцом данного вида.

Методы хранения микроорганизмов

Выделенные из почвы, отобранные в процессе скрининга мутантные высокоактивные штаммы (микроорганизмы-тесты) требуют к себе большого внимания с целью сохранения их в лабораторных условиях. Существуют следующие методы хранения микроорганизмов.

• Выделенные культуры хранятся в пробирках на агаризованных скошенных средах в течение 4-6 мес при ₊ 4 ºС с последующим пересевом на свежие среды. Хранение культур на скошенных средах под слоем стерильного вазелинового масла осуществляется при ₊ 4 ºС или при комнатной температуре.

• При необходимости длительного хранения используют лиофилизацию. Для этого в стерильные ампулы вносят выращенную культуру (на агаризованной или в жидкой питательной среде): с агаризованной среды проводят смыв, и в пробу с культуральной жидкостью добавляют криопротектор (например, раствор трегалозы до 3%, глицерина до 1%). Затем ампулы закрывают стерильными ватными тампонами и подвергают лиофильной сушке, после чего запаивают и хранят при ₊ 4 ºС или при комнатной температуре в течение 8-10 лет. Сразу после приготовления ампул и через каждые 2-3 г. проводят периодическую проверку качества хранящегося материала (процент выживаемости и активности). Подобным образом чаще всего хранят коллекционные культуры и культуры-продуценты БАВ.

• Хранят культуры и на плотных носителях, в стерильной почве в ампулах, куда вносится споровый материал. Культуры микроорганизмов, приготовленных для засева ферментеров, хранят и на специально приготовленных носителях (пшено, рис, отруби, и др.) Для этого распаренное стерильное зерно во флаконах засевают смывом спор, инкубируют до оптимальной стадии роста (спорообразования) и содержат при ₊ 4 ºС или при комнатной температуре. В процессе хранения через определенные сроки культуры оживляют и определяют процент выживаемости.

В настоящее время большое распространение получило криохранение, когда материал подвергают глубокой заморозке в жидком азоте после добавления криопротектора.