Информационно-дидактический блок

Количественное определение антибиотиков. Количественное определение антибиотиков необходимо в следующих случаях:

• в процессе биосинтеза – для определения оптимального срока ферментации и максимального накопления антибиотика в культуральной жидкости;

• для определения количества действующего начала в субстанции (по ГФ);

• для определения содержания активного вещества в лекарственной форме (по ГФ).

Преимущество химических методов количественного определения антибиотиков – быстрота проведения анализов. Если антибиотиков имеет свободную карбоксильную группу (фузидовая кислота, пенициллиновая кислота), ее можно определить прямым алкалиметрическим титрованием щелочью с индикатором. Пенициллин с помощью пенициллиназы освобождает одну карбоксильную группу, что позволяет оттитровать пенициллановую кислоту щелочью с добавлением фенолфталеина. Существует метод косвенного титрования (йодометрия), основанный на поглощении йода продуктами щелочного гидролиза пенициллина, при этом непоглощенный остаток йода оттитровывают раствором тиосульфата натрия. Разница поглощении триосульфата исходным антибиотиком и продуктом щелочного гидролиза соответствует количеству пенициллина в образце.

Метод неводного титрования. Большинство фармацевтических препаратов представляют собой слабые кислоты, слабые основания или их соли, и их количественное определение методом кислотно-основного титрования в воде не возможно. Кроме того, вещество может не растворяться в воде. Тогда применяют метод неводного титрования, так как в зависимости от растворителя одно и то же вещество может быть и кислотой, и основанием или вообще не проявлять кислотно-основных свойств. Титрование в неводных можно вести как с индикатором, так и потенциометрический. Кислотные растворители (уксусная кислота, уксусный ангидрид) используют для титрования веществ, имеющих слабовыраженные основные свойства. Основные неводные растворители (пиридин, диметилформамид) применяют для титрования веществ со слабовыраженными кислыми свойствами.

К оптическим методам количественного определения антибиотиков относят колориметрию, флуорометрию и спектрофотометрию.

Колориметрический метод основан на измерении интенсивности окраски либо исходного антибиотика (например, антрациклины окрашены в желтый цвет), либо продуктов расщепления антибиотика (стрептомицин).

Флуорометрия основана на определении интенсивности флуоресценции антибиотика по сравнению со стандартом (например, тетрациклины флуоресцируют желтым цветом).

Наиболее часто используют спектрофотометрический метод. Он применим для любых антибиотиков, имеющих максимум поглощения в УФ (200-350 нм) или в видимой области спектра (350-700 нм). С помощью спектрофотометрии измеряют величину поглощения испытуемого антибиотика при определенной длине волны, характерной для данного антибиотика, и сравнивают со стандартом. Так, группа полиеновых антибиотиков имеет характерный спектр поглощения в УФ-области – три максимума, сдвигающиеся к видимой области в зависимости от числа сопряженных связей. Другие антибиотики, например рубомицин^♠ (красного цвета), поглощают в видимой области спектра. Омомицин относится к гидрофобным антибиотикам, поэтому его выделение возможно путем экстракции из культуральной жидкости этилацетатом, а его количественную оценку в процессе биосинтеза можно провести спектрофотометрически, так как омомицин имеет максимум поглощения при длинах волн 245 и 291 нм.

Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) применяют для количественного определения любых антибиотиков. С помощью этого метода можно разделить изомеры или близкие родственные примеси, определяемые в сумме при биологическом титровании. На спектрограмме исследуемого антибиотика измеряют площадь пика по сравнению со стандартом.