Совместная работа студента с преподавателем

Самостоятельная работа студентами выполняется под непосредственным контролем преподавателя. После выполнения задания студенты должны представить тетради на проверку преподавателю.

Контрольные вопросы

1. Какие методы отделения антибиотика от культуральной жидкости в соответствии с его свойствами вы знаете?;

2. Как проводится экстракция антибиотиков из концентрата?

3. Какие растворители и смеси используются в качестве экстрагента? Какие значения рН являются оптимальными при экстракции?

4. Как проводится сорбция антибиотика на активированном угле?

5. Как осуществляется осаждение антибиотика из культуральной жидкости?

6. Как проводится хроматографическое разделение и обнаружение антибиотиков?

7. Укажите, что может содержать культуральная среда (жидкость) помимо целевого продукта?

Лабораторная работа № 11.

«Качественное определение антибиотиков омомицина и галтамицина в экстрактах культуральной жидкости с помощью ТСХ на пластинках «Силуфол»

Тема занятия: Качественное определение антибиотиков омомицина и галтамицина в экстрактах культуральной жидкости с помощью ТСХ на пластинках «Силуфол»

Цель: выработать практическое умение обоснованно выбирать и практически применять определенный метод анализа антибиотиков на примере омомицина и галтамицина.

Задачи обучения:

• Знать методы определения подлинности антибиотиков;

• Выбирать метод определения антибиотика в культуральной жидкости в соответствии с его свойствами;

• Проводить хроматографическое разделение и обнаружение антибиотиков;

• Делать точную навеску на аналитических весах:

• Проводить кислотно-основное титрование:

• Рассчитывать количественное содержание антибиотика в культуральной жидкости.

Задание № 1. Провести хроматографическое разделение экстракта культуральной жидкости на пластинке силуфола (УФ-254) в системе растворителей «петролейный эфир-ацетон» (2:1);

Материальное обеспечение работы

• Петролейный эфир;

• Ацетон

• Пластинки «Силуфол», УФ-254.

• Камеры хроматографические;

• Микропипетки:

• Пинцеты;

• Фен:

• Газовая горелка;

• УФ-лампа;

• Цилиндры 5 и 10 мл.

Методика выполнения работы. Определение основано на сорбции ЛС на силикагеле в соответствии с коэффициентами распределения в двухфазной системе растворителей.

Хроматографическое разделение экстракта культуральной жидкости проводят на пластинке силикагеля «Силуфол» (УФ-254) в системе растворителей: петролейный эфир-ацетон (2:1). На стартовую черту пластинки нужно нанести микропипеткой каплю этилацетатного экстракта. Высушить струей воздуха и прогнать каплю пластинку в указанной выше системе растворителей. Пластинку высушить и отдуть растворители до исчезновения запаха.

Визуально обнаруживается менее подвижное пятно красного цвета (антибиотик антрациклиновой группы галтамицин).

Омомицин (бесцветный) визуально не обнаруживается. Его можно визуализировать в свете УФ-лампы по поглощению в виде фиолетового пятна на зеленом фоне или при прогревании над пламенем горелки (сгорают все органическое соединения, и омомицин обнаруживается в виде коричневых зон).