Приложение к занятию № 4

1. Классификация бактерий по типу дыхания:

Аэробы – бактерии, использующие в качестве конечного акцептора электронов в дыхательной цепи молекулярный кислород (пример: псевдомонады).

Факультативные анаэробы – в качестве конечного акцептора электронов могут использовать, как молекулярный кислород, так и другие вещества. О₂ не является лимитирующим фактором (пример: стафилококк).

Микроаэрофилы – нуждаются в сниженном парциальном давлении О_2. Большинство патогенных микроаэрофилов при этом требовательны к повышенной концентрации СО₂ (5 – 10 %), их принято называть капнофилами (например, стрептококки полости рта).

Анаэробы – бактерии, для которых О₂ токсичен. По чувствительности к О₂ различают облигатные анаэробы - О₂ вызывает немедленную гибель, аэротолерантные не размножаются в присутствии кислорода, но и не погибают (клостридии возбудители столбняка и газовой гангрены).

2. Классификация бактерий по температуре роста:

Термофилы (thermos - теплый filein - любить) оптимум составляет 50 – 60⁰С, минимум 35⁰, максимум 70 – 75⁰ С.

Мезофилы (mesos - средний) оптимум составляет 30 – 37⁰ С, минимум 10⁰ С, максимум 40 – 45⁰ С.

Психрофилы (psichros - холодный) оптимум составляет 15 – 20⁰ С, минимум 0⁰С, максимум 30 – 35⁰ С.

Для выращивания возбудителей микозов наиболее часто используют температурный режим в пределах 20 – 25⁰ С.

3. Изучение биохимической активности бактерий, среды «пестрого ряда».

Биохимическая активность многих видов бактерий является стабильным и уникальным признаком, в связи с чем, биохимические свойства входят в стандартное бактериологическое исследование. В большинстве случаев, если не нужны дополнительные исследования посев выделенной от больного культуры проводят на среды короткого «пестрого ряда», для этого используют 4 пробирки со средами Гисса, позволяющие изучить сахаралитическую активность. Состав сред Гисса: питательная основа МПБ, к которому добавлен 1 % соответствующего углевода (глюкоза; лактоза; манит, многоатомный спирт; сахароза), индикатор Андреде (карболовый фуксин Циля, нейтрализованный едким натром до полного обесцвечивания), для выявления кислых продуктов расщепления углеводов и стеклянная трубочка, запаянная с одного конца – поплавок. При расщеплении углевода с образованием кислоты цвет среды из желтого меняется в красный, кислоты и газа – цвет красный в поплавке пузырьки газа.

Для изучения протеолитических и морфологических свойств «пестрый ряд» дополняют:

5 пробирка – МПБ, для выявления характера роста культуры (пленка, осадок, помутнение), и газообразных продуктов расщепления аминокислот, для этого под пробку над бульоном закрепляют для определения индола – фильтровальную бумагу, пропитанную щавелевой кислотой, при положительной реакции (после инкубации, которая обычно длиться 24 часа) - краснеет; для определения сероводорода используют фильтровальную бумагу пропитанную ацетатом свинца при положительной реакции - чернеет, на аммиак – лакмусовая бумага при положительной реакции синеет.

6 пробирка – полужидкий агар Пешкова, для определения подвижности см. рис. 9 во втором занятии.

7 пробирка молоко для определения наличия у бактерий молочно-сычужного фермента, при положительной реакции происходит створаживание.

8 пробирка – скошенный агар – для поддержание чистой культуры, обязательное требование бактериологического метода поддержание чистой культуры на всех этапах исследования до постановки окончательного диагноза.

Помимо общепринятых сред, в состав "пестрого ряда" нередко включаются среды с другими углеводами, а также среда для определения уреазы - фермента, расщепляющего мочевину. Среда представляет собой МПБ с добавлением 1 – 2 % мочевины и индикатора фенолового красного. При разложении мочевины образуется аммиак, вызывающий изменение рН среды, и соответственно желтый цвет индикатора меняется на красный. Для изучения протеолитических свойств, достаточно часто так же используют пробирку со столбиком желатина.