3. Сложные методы окраски микробов в изучении их структуры

3.1. Изучение структуры клеточной стенки бактерий, окраска по Граму

Окраска по Граму (в модификации Синева) производят следующим образом. Из исследуемого материала готовят тонкий препарат-мазок, высушивают его на воздухе и фиксируют на пламени спиртовки.

На препарат кладут кусочек фильтровальной бумаги, пропитанной карболовый раствором генцианвиолета, и увлажняют его 2-3 каплями воды. Окрашивание продолжается 2 минуты.

Сбросив пинцетом фильтровальную бумагу, на препарат наливают на 2 минуты раствор Люголя. Слив раствор Люголя, не промывая препарат, наливают на него для обесцвечивания несколько капель 96⁰ спирта на 30 секунд (обесцвечивание должно производиться при покачивании стекла). Быстро смыв спирт водой, препарат докрашивают раствором фуксина Пфейффера в течение 1-2 минут, после чего промывают водой и высушивают.

Из исследуемой культуры приготовить препарат и окрасить по Граму, промикроскопировать и зарисовать.

3.2. Включения у бактерий. Демонстрация препарата

«зерна волютина окраска по Нейссеру».

Методика окраски заключается в следующем - фиксированный мазок окрашивают заранее приготовленной уксуснокислой синькой Нейссера 5 минут. Промывают препарат водой и обрабатывают его раствором Люголя в течение 1 минуты. Не промывая водой, докрашивают препарат везувином 15 секунд. Затем промывают, высушивают и микроскопируют. Зерна волютина окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, а тело бактерий - в соломенно-желтый цвет. Познакомиться с демонстрацией мазка и зарисовать.

3.3. Капсула бактерий, бактериоскопическое исследование препарата-мазка из культуры палочки Фридлендера окрашенного по методу Бурри-Гинса

Промикроскопировать и зарисовать демонстрационный препарат.

Методика окраски по Бурри-Гинса: на предметное стекло нанести каплю туши, внести в нее небольшое количество исследуемой культуры с помощью бактериальной петли, тщательно перемешать. Ребром второго предметного стекла сделать мазок, как для исследования крови. Высушить мазок на воздухе и зафиксировать на пламени спиртовки. Нанести на мазок несколько капель водного фуксина на 2-3 минуты, затем промыть, высушить и промикроскопировать. На фоне туши четко видны окрашенные фуксином бактериальные клетки, окруженные светлым овалом (капсулы). Зарисовать препарат.

3

Рис.10. Исследуемая культура. __________________

Окраска по Граму

Рис.11. Зерна волютина.

Klebsiella pneumoniae.

Окраска по Нейссеру

Рис. 12. Капсула бактерий.

Окраска по Бурри-Гинсу

.4. Споры у бактерий. Исследование спор у Streptobacillus в неокрашенных препаратах (раздавленная капля) и в препаратах-мазках, окрашенных водным фуксином и по Клейну

В препарате "раздавленная капля" споры, обладающие более высоким коэффициентом преломления, выглядят в виде блестящих или темных (в зависимости от фокусировки объектива) образований, отличающихся от более тусклых и неясно очерченных тел бактерий.

При окраске фуксином Пфейффера споры не окрашены и выглядят в виде бесцветных овальных образований, расположенных внутри окрашенных клеток или свободно лежащих между клетками.

Для окраски препарата по способу Клейна фиксированный мазок покрывают фильтровальной бумагой, на бумагу наливают карболовый фуксин Циля и подогревают препарат над спиртовкой до появления паров 4-5 раз. Пинцетом снимают бумажку и обесцвечивают препарат, погружая его в стаканчик с 1 %-ным раствором серной кислоты на 5-6 секунд. Тщательно промывают препарат и дополнительно докрашивают метиленовым синим 3-5 минут. Промывают препарат водой, высушивают и микроскопируют. Споры окрашиваются в красный цвет, вегетативные клетки - в синий. Все демонстрационные препараты зарисовать.

Рис. 13. Споры бактерий «раздавленная капля»

Рис. 14. Споры бактерий. Окраска фуксином Пфейффера

Рис. 15. Споры бактерий. Окраска по Клейну