И сибирской язвы

План занятия:

1. Приготовление, окраска и микроскопия препаратов-мазков из убитых культур бруцелл.

2. Бактериологическая диагностика бруцеллеза. Выделение гемокультуры (разбор).

3. Серологическая диагностика бруцеллеза. Реакция Райта. Регистрация результатов реакции Райта.

4. Ускоренный метод серологической диагностики бруцеллеза – реакция Хеддлъсона и др.

5. Аллергическая диагностика бруцеллеза. Постановка пробы Бюрне (разбор).

6. Знакомство с препаратами, применяемыми для диагностики, профилактики и лечения бруцеллеза (диагностикумы, бруцеллин, профилактические и лечебная вакцины).

7. Возбудитель сибирской язвы. Изучение морфологических и культуральных свойств. Приготовление и микроскопия мазков из чистой куль­туры авирулентной сибиреязвенной палочки.

8. Знакомство с иммунопрепаратами, применяемыми для диагности­ки, профилактики и лечения сибирской язвы (антраксин, вакцины, сыворотки).

Методические указания

1. Приготовить, окрасить по Граму и промикроскопировать пре­парат из убитой культуры бруцелл. Обратить внимание на размеры микроорганизмов.

3. Поставить реакцию Райта с сывороткой больного бруцеллезом по классической схеме пробирочной реакции агглютинации (см. Часть I, занятие 16). Диагностический титр реакции Райта - 1:200.

Зарегистрировать в таблице результаты реакции Райта. Сформулировать и записать вывод: указывают ли результаты реакции на на­личие заболевания бруцеллезом у данного больного?

Регистрация результатов реакции Райта

Разведения сыворотки	1:50	1:100	1:200	1:400	1:800	Контроль
Результат реакции

Вывод: ______________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

4. На стекле размечают карандашом 4 квадрата размером 3x3 см каждый. Микропипеткой наносят в квадраты капли сыворотки объемом 0,04, 0,02 и 0,01 мл, в последний квадрат одну каплю (0,03 мл) физиологического раствора (контроль). В каждую каплю другой микропипет­кой добавляют по 0,03 мл бруцеллезного диагностикума. Перемешивают капли стеклянной палочкой пли петлей, начиная с контрольной капли и идя от меньших количеств сыворотки к большим. Слегка подогревая и покачивая стекло, наблюдают за появлением агглютинации, которая должна наступать в течение 5 минут.

Оценка реакции: агглютинация только в первой капле – реакция сомнительная; агглютинация в первой и второй каплях – реакция положительная; агглютинация во всех трех каплях – реакция резко положи­тельная.

Примечание: Реакция Хеддльсона имеет только скрининговое, ориентировочное значение. В случае ее положительного результата необходимо ставить более надежные серологические реакции (Райта, РПГА, ИФМ) и/или аллергическую пробу Бюрне.

Зарисовать реакцию Хеддльсона с указанием доз сыворотки в каждой капле.