1.4.1. Интраназальное заражение

Метод используют для выделения пневмотропных вирусов. Заражение мышей проводится под эфирным наркозом. Животных помещают в закрытую стеклянную банку, в которую положен кусок ваты, пропитанный эфиром. С помощью шприца или пастеровской пипетки в ноздри животного вводят 0,03-0,1 мл заражающего материала. За животными устанавливается наблюдение, при проявлении признаков заболевания мышей забивают при помощи эфирного наркоза, а затем вскрывают.

Этапы вскрытия животных:

1. Увлажнённый 5%-ным раствором лизола или фенола труп мыши фиксируют брюшком кверху на поверхности кюветы со смесью воска и парафина.

2. Обрабатывают кожные покровы спиртом, йодом и вновь спиртом; опаливают пламенем.

3. Ножницами делают продольный разрез кожи от нижней челюсти до лобка и боковые разрезы к лапкам, отсепаровывают её.

4. Вскрывают грудную полость, вырезав грудину ножницами по рёберным хрящам.

5. Осматривают внешний вид органов грудной полости, обращая внимание на наличие экссудата. Извлекают лёгкие при строгом соблюдении асептики и сохраняют их при минусовой температуре в морозильнике до получения ответа на бактериологический контроль-результат посева кусочка легочной ткани в мясо-пептонный бульон (после выдерживания его в термостате при 37⁰С в течение суток).

6. При отрицательном контроле на бактериальную загрязнённость готовят 10%-ную суспензию легочной ткани путём растирания ткани в фарфоровой ступке, с постепенным добавлением физиологического раствора.

7. Суспензию центрифугируют для осаждения крупных частиц при 1500 об/мин, надосадочную жидкость собирают и используют для последующего вирусологического исследования.

1.4.2. Интрацеребральное заражение

Метод предназначен для выделения нейротропных вирусов. При заражении мыши в мозг её плотно прижимают левой рукой к столу, большим и указательным пальцами оттягивают кожу головы к затылку, мизинцем и безымянным фиксируют хвост. Лобный участок головы предварительно обрабатывают 3%-ной йодной настойкой. Заражающий материал (кровь) в объёме 0,02-0,03 мл вводят в мозг туберкулиновым шприцем с тонкой иглой путём прокола лобной кости на глубину 1,5-2 мм.

Этапы вскрытия животных:

1. Труп увлажняют раствором лизола или фенола.

2. Обрабатывают кожные покровы головы последовательно спиртом, йодом и вновь спиртом, опаливают пламенем.

3. Вскрывают и отделяют кожу головы. Отрезают голову, помещают её в стерильную чашку Петри, проведя предварительно через пламя горелки.

4. Вскрывают ножницами черепную коробку, извлекают мозг и сохраняют его в замороженном состоянии до получения результата бактериологического контроля.

5. В случае отрицательного бактериологического контроля из мозговой ткани приготавливают 10%-ную суспензию в физиологическом растворе. Освобождают её от крупных тканевых частиц центрифугированием, надосадочную жидкость используют для вирусологической работы.

На лабораторных животных проводят титрование вирусов, ставят реакцию нейтрализации; животных используют для получения вирусных вакцин, диагностикумов, противовирусных сывороток.

Контрольные вопросы

1. Назовите и охарактеризуйте методы электронной микроскопии, применяемые при изучении вирусов.

2. Применение светового микроскопа для обнаружения вирусов. Примеры.

3. Объясните, что понимают под тканевым (оранным) тропизмом вирусов.

4. Солевые растворы и питательные среды, используемые для культивирования культур клеток. Их состав. Примеры.

5. Назовите и охарактеризуйте основные типы культур клеток.

6. Первичные культуры клеток. Принципы приготовления этих культур.

7. Перевиваемые культуры клеток. Их характеристика.

8. Диплоидные культуры клеток. Их характеристика.

9. Применение культур клеток в вирусологии, их преимущества и недостатки.

10. Строение развивающегося куриного эмбриона (КЭ) и подготовка инкубированных КЭ к заражению. Способы заражения КЭ.

11. Преимущества и недостатки культивирования вирусов в КЭ.

12. Культивирование вирусов в организме восприимчивого животного. Способы заражения.

13. Применение экспериментальных животных в вирусологии, преимущества и недостатки.

Тематика докладов

1. Преимущества выращивания вирусов в культуре клеток.

2. Особенности культивирования вирусов гриппа.

3. Основные методики изготовления вакцин против гриппа.

4. Трудности в создании вакцин против вируса иммунодефицита человека.

ЛИТЕРАТУРА

1. Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. 3-е изд. – М.: Медицина, 1982.

2. Букринская А.Г. Вирусология. – М.: Медицина, 1986.

3. Голубев Д.Б. Руководство по применению клеточных культур в вирусологии. – Л., 1986. Электронный учебник.

4. Микробиология: Учебник для студ. биол. специальностей вузов / М.В. Гусев, Л.А. Минеева. – 4-е изд. – М.: Издательский центр «Академия», 2003. Электронный учебник.

5. Общая медицинская вирусология / Н.С. Горячкина и др.; под ред. Н.С. Горячкиной, Л.И. Кафарской. – Ростов н/Д: Феникс, 2007.

6. Общая микробиология: Лабораторный практикум. – Изд. 2-е, перераб., доп. – Нальчик: Каб.-Балк. ун-т, 2005.

7. www.medmaster.net

8. http://dronel.genebee.msu.su/journals/ microb-r.html