3 Выводы по разделу
1. Существующие методы выявления эндоспор имеют существенные различия в составе красителей, растворов для дифференцировки, обесцвечивающих растворов, что влияет на конечный результат исследования.
2. Люминесцентные методы окраски отличаются высокой чувствительностью по сравнению с другими способами микроскопического выявления эндоспор. Однако, вследствие использования труднодоступного реактива, который не производится в нашей стране, указанные методы не нашли широкого применения в лабораторной практике. В этой связи мы подобрали флюорохром, пригодный для окраски эндоспор, обесцвечивающий раствор, время и условия флюорохромирования
3. Наилучший результат наблюдается при окрашивании аурамином 00 и корифосфином, так как при этом наблюдается более контрастная картина окраски эндоспор и бактериальных клеток.
С целью снижения ложноположительных результатов выявления эндоспор был предложен в качестве дифференцирующего раствора солянокислый спирт.
5. В сравнительных экспериментах разработанного метода в сопоставлении с известными классическими методами окраски эндоспор, основанными на применении бактериальных красителей, было установлено, что результаты, полученные при помощи разработанного метода, совпадают либо превышают результаты классических методов окраски.
Организационно-экономический раздел
С целью идентификации микроорганизмов в микробиологических лабораториях изучают не только форму и размеры бактериальной клетки, но и отдельные элементы ее структуры: цитоплазму, включения, нуклеотид, оболочку, капсулу, жгутики, споры. Бактериальные эндоспоры представляют собой покоящиеся формы клеток, в которых процессы жизнедеятельности сильно заторможены. Они имеют многослойную оболочку, содержат мало свободной воды и поэтому хорошо переносят различные неблагоприятные воздействия, губительные для вегетативных клеток. Современная бактериология располагает довольно обширным набором методом выявления эндоспор. Условно их можно разделить на четыре группы.
Одним из преимуществ методов люминесцентной микроскопии является высокая чувствительность при выявлении эндоспор, однако Люминесцентная микроскопия не нашла широкого применения в микробиологической практике из-за использования в качестве флюорохрома бриллиантсульфофлавина, который является труднодоступным реактивом.
Поэтому разработка нового люминесцентного метода окраски бактериальных эндоспор, который был бы прост в исполнении и нагляден, является актуальной.
1 Структура декомпозиции работ по уровням
Для формирования иерархической структуры разделим проект на составные части, необходимые и достаточные для эффективного осуществления процесса управления проектом в интересах различных участников проекта. Условием, необходимым для успешного завершения проекта, является выполнение всех поставленных задач.
Структура декомпозиции работ по уровням представлена на рисунке 13.
Получение культур для исследований
Разработка способа окраски бактериальной
эндоспор
Разработка люминесц. метода
Изучение диагностической эффективности
известных методов окраски бактериальных
эндоспор
Оценка результатов
Подготовка
Выращивание культур
Разработка люминесцентного метода
окраски спор и сравнение его эффективности
с известными методиками
Приготовление посуды
Приготовление ПС МПА
Автоклавирование
Розлив ПС
Отбор проб
Высев проб на среду
Рост культуры на ПС
Разработка люминесцентного метода
окраски эндоспор
Выявление наиболее информативной
методики
Подготовка
Окрашивание мазков в соответствии с
известными методиками
Макроскопическое исследование колоний
Окрашивание мазков в соответствии с
разработанной методикой
Описание колоний
Приготовление растворов потрав
Приготовление растворов красителей
Приготовление мазков полученных культур
Микроскопирование и микрофотографирование
Спорообразование
Оценка результатов и выявление наиболее
информативной методики
Установление доли окрашенных спор в
препарате
Микроскопирование и микрофотографирование
Рисунок 13. Структура
декомпозиции работ по уровням
Установление доли окрашенных спор в
препарате
Определяем продолжительность всех конечных операций и каждой из них присваиваем буквенный код (таблица 9).
Таблица 9. Список операций проекта с указанием связей и продолжительности
Код операции |
Название операции |
Код предшес-твующей операции |
Продолжитель- ность операции,ч (суммарн.)/дни |
A |
Приготовление посуды |
- |
3/3 |
B |
Приготовление ПС |
A |
1,5/3 |
C |
Автоклавирование |
B |
1,5/3 |
D |
Розлив ПС по чашкам Петри |
C |
3/3 |
E |
Отбор проб |
D |
1/1 |
F |
Высев проб на среду |
E |
2/1 |
G |
Рост культур на ПС |
F |
48/2 |
H |
Макроскопическое исследование колоний |
G |
0,5/1 |
I |
Описание колоний |
H |
1/1 |
J |
Спорообразование
|
D |
72/3 |
K |
Приготовление растворов осветлителей |
J |
6/3 |
L |
Приготовление растворов красителей |
K |
3/3 |
M |
Приготовление мазков полученных культур |
F, L |
8/8 |
N |
Окрашивание мазков в соответствии с известными методиками |
M |
16/8 |
O |
Микроскопирование и микрофотографирование |
N |
8/8 |
P |
Установление доли окрашенных спор бактерий в препарате |
O |
5/5 |
Q |
Оценка результатов и выявление наиболее информативной методики |
P |
3/1 |
R |
Разработка люминесцентного метода окраски эндоспор |
Q |
36/12 |
S |
Окрашивание мазков в соответсвии с разработанной методикой |
M, R |
14/7 |
T |
Микроскопирование и микрофотографирование |
S |
7/7 |
U |
Установление доли окрашенных спор в мазках |
T |
6/3 |
V |
Оценка результатов и сравнение эффективности разработанного метода по сравнению с известными методами |
U, Q |
10/5 |