- •Разработка люминесцентного метода выявления эндоспор у бактерий
- •«Вятский государственный университет» (фгбоу впо «ВятГу»)
- •Задание на дипломную работу
- •Календарный план работы
- •Реферат
- •Содержание
- •Введение
- •Обзор и анализ научно-технической информации
- •1 Роль спорообразующих бактерий в биотехнологии
- •2. Физиологические и морфологические изменения, сопровождающие споруляцию и прорастание спор
- •2.1 Условия и стадии споруляции
- •2.2 Свойства зрелых спор, прорастание спор
- •3 Споруляционные белки проспоры, споры и материнской клетки
- •4 Препараты фиксированных окрашенных клеток и спор микроорганизмов
- •4.1 Приготовление мазка и фиксация препарата
- •4.2 Методы, основанные на использовании для окраски эндоспор бактериологических красителей
- •4.2.1 Метод Циля-Нильсена
- •4.2.2 Метод Ожешко
- •4.2.3 Метод Шеффера-Фултона
- •4.3 Способы негативного окрашивания эндоспор
- •4.4 Прижизненное выявление эндоспор при помощи фазово-контрастной микроскопии
- •4.5 Методы люминесцентной окраски эндоспор
- •5. Выводы по обзору научно-технической и патентной информации
- •Техническое и социально-экономическое обоснование темы. Задачи дипломной работы
- •Основная часть
- •1 Материалы и методы
- •1.1 Микробные тест-культуры
- •1.2 Питательные среды, растворы и реактивы
- •1.3 Оборудование и приборы
- •1.4 Методы исследований
- •2 Разработка люминесцентного метода выявления эндоспор
- •2.1 Изучение диагностической эффективности известных методов окраски эндоспор
- •2.2 Разработка люминесцентного метода выявления эндоспор
- •2.3 Сравнение диагностической эффективности методов окраски эндоспор бактериологическими красителями и разработанного метода
- •3 Выводы по разделу
- •1 Структура декомпозиции работ по уровням
- •2 Организационная структура проекта
- •3 Ресурсы
- •4 Таблицы назначений ресурсов по операциям
- •5 Расчет стоимости операций
- •6 Бюджет затрат
- •7 Выводы по разделу
- •Безопасность жизнедеятельности
- •1 Экологическое обоснование темы дипломной работы
- •2 Свойства применяемых реактивов и препаратов
- •3 Потенциальные опасности при выполнении экспериментальной части работы
- •4 Разработка мероприятий по безопасному проведению работ
- •4.1 Организация рабочего места
- •4.2 Меры безопасности при работе с реактивами
- •4.3 Меры безопасности при работе со стеклянной посудой
- •4.4 Меры безопасности при работе с электроприборами
- •4.5 Меры безопасности при работе с микроорганизмами
- •4.6 Промышленные средства индивидуальной защиты
- •4.7 Первая доврачебная помощь при химических и термических ожогах
- •5 Производственная санитария
- •5.1 Санитарно-гигиеническая характеристика лаборатории
- •5.2 Метеоусловия
- •5.3 Отопление
- •5.4 Вентиляция
- •5.5 Освещение
- •5.6 Водоснабжение
- •5.7 Канализация
- •5.8 Пожарная профилактика
- •6. Выводы по разделу
- •Заключение
- •Приложение 1
- •Авторская справка
- •Приложение 2
- •Перечень принятых определений и терминов
- •Приложение 3
- •Перечень принятых обозначений и сокращений
- •Приложение 4
- •Люминесцентный метод окраски бактериальных эндоспор
- •Приложение 5
- •Приложение 6
- •Приложение 7
- •Список использованных источников
6. Выводы по разделу
В процессе выполнения экспериментальной части использовали реактивы, наиболее опасными из которых для организма человека являются соляная кислота, серная кислота.
Вместе с тем, исследовательская работа выполнялась в условиях микробиологической лаборатории и была связана с рядом опасностей, которые сопутствуют различным технологическим операциям. Среди таких технологических операций наиболее опасными являются стерилизация посуды и питательных сред, розлив питательной среды по чашкам Петри, а также приготовление мазков.
Также к опасным факторам, с которыми приходилось работать, следует отнести электроприборы и стеклянную посуду.
Таким образом, при выполнении экспериментальной части соблюдались меры безопасности при работе с химическими реактивами, стеклянной посудой, микроорганизмами и электрическими приборами.
Из средств индивидуальной защиты при выполнении работы использовался халат, шапочка и тапочки, а при работе с едкими веществами применяли резиновые перчатки. Условия труда в лаборатории соответствовали санитарным нормам и правилам, правилам пожарной безопасности.
Заключение
С целью идентификации микроорганизмов в микробиологических лабораториях изучают не только форму и размеры бактериальной клетки, но и отдельные элементы ее структуры: цитоплазму, включения, нуклеотид, оболочку, капсулу, жгутики, споры. Бактериальные эндоспоры представляют собой покоящиеся формы клеток, в которых процессы жизнедеятельности сильно заторможены. Они имеют многослойную оболочку, содержат мало свободной воды и поэтому хорошо переносят различные неблагоприятные воздействия, губительные для вегетативных клеток. Современная бактериология располагает довольно обширным набором методов выявления эндоспор. Все эти методы различаются по качеству результата и чувствительности.
Таким образом, представилось целесообразным разработать люминесцентный метод выявления эндоспор, позволяющего получать наиболее информативные препараты.
В ходе исследований поставленная цель была достигнута. Нами было показано, что классические методы выявления эндоспор имеют существенные различия в составе красителей, растворов для дифференцировки, обесцвечивающих растворов, что влияет на конечный результат исследования. Люминесцентные методы окраски отличаются высокой чувствительностью по сравнению с другими способами микроскопического выявления эндоспор. Однако, вследствие использования труднодоступного реактива, который не производится в нашей стране, указанные методы не нашли широкого применения в лабораторной практике. В этой связи мы подобрали флюорохром, пригодный для окраски эндоспор, обесцвечивающий раствор, время и условия флюорохромирования.
Наилучший результат наблюдается при окрашивании аурамином 00 и корифосфином, так как при этом наблюдается более контрастная картина окраски эндоспор и бактериальных клеток. С целью снижения ложноположительных результатов выявления эндоспор был предложен в качестве дифференцирующего раствора солянокислый спирт.
В сравнительных экспериментах разработанного метода в сопоставлении с известными классическими методами окраски эндоспор, основанными на применении бактериальных красителей, было установлено, что результаты, полученные при помощи разработанного метода, совпадают либо превышают результаты классических методов окраски.
Таким образом, был разработан люминесцентный метод окраски бактериальных оболочек, обеспечивающий высокую степень надежности результата и наибольшую информативность препарата.
При выполнении экспериментальной части соблюдались меры безопасности при работе с химическими реактивами, стеклянной посудой, микроорганизмами и электрическими приборами.
Вся сумма затрат на разработку оптимизированного метода окраски бактериальной оболочки составила 18560,14 руб.
