Лабораторная работа № 15 Обнаружение дегидрогеназы 3-фосфоглицеринового альдегида

Принцип метода

3-фосфоглицериновый альдегид в ходе анаэробного превращения глюкозы дегидрогеназой 3-фосфоглицеринового альдегида окисляется в 1,3-дифосфоглицериновую кислоту. При этом происходит восстановление НАД, который можно обнаружить по восстановлению метиленового синего в лейкосоединение.

Реактивы:

1. глюкоза, 2% раствор;

2. дрожжи;

3. метиленовый синий, 0,002% раствор.

Ход работы

В пробирку вносят кусочек дрожжей (величиной с горошину), несколько капель раствора глюкозы, растирают содержимое стеклянной палочкой до получения равномерной взвеси. Добавляют каплю раствора метиленового синего, перемешивают содержимое пробирки стеклянной палочкой. Ставят пробирку в штатив и наблюдают обесцвечивание метиленового синего, начинающееся со дна пробирки.

Результат: __________________________________________________________________

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод______________________________________________________________________

______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Обнаружение молочной кислоты

Принцип метода

Молочная кислота в присутствии фенолята железа (реактив Уффельманна), окрашенного в фиолетовый цвет, образует лактат железа желто-зеленого цвета.

Ход работы

1 г мышц растирают до гомогенного состояния в ступке с небольшим количеством кварцевого песка в течение 3 мин, добавив 5 капель воды. Затем приливают 3 мл дистиллированной воды и фильтруют через смоченную водой вату.

К 15 каплям фильтрата добавляют по каплям реактив Уффельманна (20 капель 1% раствора фенола + 2 капли 1% раствора хлорного железа) до появления фиолетовой окраски. В присутствии молочной кислоты фиолетовая окраска жидкости переходит в желто-зеленую, так как образуется лактат железа. Для сравнения проводят реакцию Уффельманна с раствором молочной кислоты и наблюдают развитие желто-зеленого окрашивания.

Результат: __________________________________________________________________

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод_______________________________________________________________________

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лабораторная работа № 16 Проба Бенедикта на глюкозу

Реактив Бенедикта:

В колбу на 1 л наливают 700 мл дистиллированной воды, добавляют 173 глимоннокислого натрия (Na₃С₆Н₅0_7*11Н₂О), 100 г безводного (или 200 г кристаллического) углекислого натрия. Нагревают до растворения. Отдельно растворяют 17,3 г сернокислой меди в 100 мл воды. Смешивают оба раствора, непрерывно взбалтывая, и после охлаждения доливают до 1 л дистиллированной водой в мерной колбе.

Ход работы

В пробирку наливают 5 мл реактива Бенедикта и прибавляют 0,4—0,5 мл мочи. После перемешивания пробу нагревают 2 мин на пламени или 5 мин кипятят на водяной бане. Раствор охлаждают 5—7 мин.

Оценка результатов

При наличии глюкозы моча окрашивается в зеленый, желтый или красный цвет, на дне пробирки образуется осадок. Пробу оценивают по условной шкале от 0 до 4 баллов. При зеленой окраске без наличия осадка — проба отрицательная. Проба положительная, если количество глюкозы в моче превышает 0,5 г/л. При содержании в моче 0,5—5,0 г/л глюкозы цвет пробы зеленый (1+); 5—7,5 г/л -желто-зеленый (2+); 10 г/л — желтый (3+); 20 г/л и выше — красный (4+). Проба Бенедикта самая чувствительная из редукционных проб на глюкозу в моче. Ввиду значительного разведения (в 10—12 раз) восстанавливающее действие целого ряда редуцирующих веществ в моче выражено слабее, чем в других пробах.

Вывод_______________________________________________________________________

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Выделение гликогена из печени

Принцип метода Гликоген хорошо растворим в воде и достаточно устойчив в слабокислой среде, поэтому метод выделения сводится к механическому разрушению ткани и экстракции гликогена 5% раствором ТХУ.

Реактивы, исследуемый материал:

1. ТХУ, 5% раствор;

2. этиловый спирт, 96%;

3. сульфат аммония в порошке;

4. ацетат свинца, 10% раствор;

5. раствор Люголя;

6. NaС1, 0,85% раствор;

7. печень сытого и голодного животного.