Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами

Принцип метода. Минеральные кислоты вызывают дегидратацию белковых частиц и образуют комплексные соли с белками. Осадок белка растворяется в избытке кислоты, за исключением азотной кислоты. Это позволяет использовать азотную кислоту при клинических исследованиях для количественного определения белков.

Реактивы:

1. концентрированная HNO₃;

2. концентрированная H₂SO₄;

3. 1 % раствор яичного белка.

Ход работы. В пробирку вносят 10 капель концентрированной азотной кислоты, затем осторожно из пипетки наслаивают по стенке пробирки примерно 10 капель раствора белка так, чтобы жидкости не смешивались. Наблюдают, как на границе двух жидкостей образуется белое мутное кольцо. Пробирку встряхивают и добавляют избыток азотной кислоты. Осадок не растворяется. Проделывают то же самое с серной кислотой. Осадок при этом растворяется.

Результат: ___________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод: ______________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Осаждение белков органическими кислотами

Принцип метода. Как и неорганические кислоты, трихлоруксусная, сульфосалициловая и другие органические кислоты, вызывая дегидратацию и образуя комплексные соли, денатурируют белки.

Реактивы:

1. 1 % раствор яичного белка;

2. 10 % раствор ССI₃СООН;

3. 20 % раствор сульфосалициловой кислота С₆Н₃(ОН)(СООН)SО₃Н.

Ход работы. В пробирку наливают 5 капель раствора белка, затем добавляют 2 капли трихлоруксусной кислоты 10 % раствора ССI₃СООН (ТХУ) (агрессивная жидкость!) или 2 капли 20 % раствора сульфосалициловой кислота С₆Н₃(ОН)(СООН)SО₃Н и наблюдают появление осадка белка.

Результат: ___________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод: ______________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Растворимость белков

Принцип метода. Многие белки хорошо растворяются в воде, что обусловлено наличием па поверхности белковой молекулы свободных гидрофильных групп (-ОН, -NН₂, -СООН и др.). Различные белки растворяются по-разному; белки опорных тканей (кератин, проколлаген, коллаген, эластин и др.) нерастворимы в воде.

Растворимость белка в воде зависит от характера белка, реакции среды и присутствия электролитов. В кислой среде лучше растворяются белки, обладающие кислыми свойствами (альбумины, глобулины, проламины, глютелины), щелочные белки (протамины и гистоны) лучше растворяются в щелочной среде.

Различия в растворимости отмечаются как среди кисло-, так и среди щелочно-реагирующих белков. Например, альбумины растворяются в дистиллированной воде, а глобулины растворяются в воде только в присутствии электролитов.

Реактивы:

1. разведенный яичный белок;

2. 5 % раствор NaCI;

3. кератин.

Ход работы. В одну пробирку вносят 2 капли не разведенного яичного белка, 20 капель воды, содержимое перемешивают. При этом яичный альбумин растворяется, а яичный глобулин выпадает в виде небольшого осадка. В другую пробирку вносят 2 капли яичного белка и 20 капель 5% раствора хлорида натрия. В слабом солевом растворе растворяются и альбумины, и глобулины.

В две другие пробирки помещают небольшое количество кератина (волосы). В одну пробирку вносят 20 капель воды, в другую — 20 капель 5% раствора хлорида натрия. Кератин не растворяется ни в воде, ни в солевом растворе.

Результат:

Название белка	Н2О	5 % NaCI
Яичный альбумин
Яичный глобулин
Кератин

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________