Общий вид прибора

1. Микроамперметр (измерительный прибор имеет две шкалы: нижняя (D) - шкала оптической плотности (от 0 до 1,5), верхняя - регистрирует коэффициент светопропускания (от 0 до 100%).

2. Крышка кюветного отделения, которую при открывании и закрывании держат за специальные ручки (2а).

3. Рукоятка установки нужного светофильтра.

4. Рукоятка перемещения кювет, установленных в кювето- держатель в кюветном отделении.

5. Рукоятка включения фотоприемников (чувствительность). Возможны три положения этой рукоятки: 1, 2, 3 (чувствительность от меньшей к большей). Рукоятка устанавливается на цифры черного цвета в интервалах длин волн 315-540 нм или красного цвета при длине волн 590-980 нм.

6. Рукоятка “Установка грубо”.

7. Рукоятка “Установка точно”.

8. Включатель и выключатель сетевого напряжения находится на задней стенке прибора (внизу, слева).

9. Индикаторная лампочка.

Измерение оптической плотности на кфк-2

1. С помощью рукоятки 3 установить нужный светофильтр (по длине волны).

2. Рукояткой 5 установить чувствительность в положение 1 черного или красного цвета в зависимости от длины волны.

3. Рукоятки 6 и 7 (“установки грубо, точно”) повернуть до упора влево. При таком положении рукояток чувствительность минимальна, что предохраняет микроамперметр от перегрузки.

4. Включить прибор в сеть: вилку шнура вставить в розетку электросети, рукоятку 8 - в положение “включено”. Загорается сигнальная лампочка (9). Прибор прогревать 15-20 минут с открытой крышкой кюветного отделения.

5. Поставить кювету с растворителем (или контролем) во второе (дальнее от передней стенки) гнездо кюветодержателя, а кювету с исследуемым раствором - в первое (ближнее) гнездо. Закрыть крышку кюветного отделения.

6. Кювету с растворителем (контролем) поместить в световой поток, повернув рукоятку 4 до упора влево.

7. Установить стрелку микроамперметра на нуль по шкале оптической плотности рукояткой 6 (“установка грубо”). В случае необходимости подвести стрелку к нулю рукояткой 7 (“установка точно”).

8. Переместить в световой поток кювету с исследуемым раствором, повернув рукоятку 4 до упора вправо и записать значение оптической плотности по нижней шкале микроамперметра.

9. Сразу повернуть рукоятки 6 и 7 до упора влево.

10. По окончании работы убрать кюветы и навести порядок в кюветном отделении и у фотоэлектроколориметра, отключить прибор от электросети и вымыть кюветы.

Количественное определение белка Биуретовый метод

Количественное определение белка в биологических жидкостях является обязательным при постановке диагноза многих заболеваний. Существует несколько методов количественного определения белка: колориметрический, спектрофотометрический и др.

Принцип метода. Одним из колориметрических методов количественного определения белка является биуретовый метод, основанный на биуретовой реакции. В щелочной среде ионы меди образуют с белками комплексы фиолетового цвета. Интенсивность окрашивания в определенных пределах пропорциональна концентрации белка.

Реактивы:

1) биуретовый реактив 3,5 г растворить в 250 мл дистиллированной воды;

2) стандартный раствор с содержанием белка 2,5; 5,0 и 7,5 мг в 1 мл;

Ход работы.

1. В 4 пробирки вносят по 1 мл раствора белка. В первый три пробирки помещают стандартные растворы белка с известной концентрацией. В четвертую пробирку наливают раствор с неизвестной концентрацией белка, которую нужно определить.

2. В каждую пробирку добавляют по 4 мл биуретового реактива. Содержимое пробирок хорошо перемешивают и оставляют на 20 минут при комнатной температуре для развития окраски. Окрашенные растворы колориметрируют на ФЭКе в кюветах с толщиной 1 см, при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр). В качестве контрольного раствора используют биуретовый реактив.

3. Стоят калибровочную кривую, откладывая по оси абсцисс концентрации стандартных растворов белка, а на оси ординат – соответствующие значения оптической плотности. Пользуясь этой кривой и зная оптическую плотность раствора белка с неизвестной концентрацией, определяют в нем содержание белка.

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________