3.3 Лабораторная работа 22. Выделение гликопротеида из слюны

По химической природе гликопротеиды представляют со­бой сложные белки, состоящие из белкового компонента и полисахарида. При гидролизе белковый компонент распада­ется на аминокислоты, а полисахарид на гексозы, гексозамины и уроновые кислоты.

Простетическне группы некоторых гликопротеидов извест­ны под названием мукополисахаридов. К мукополисахаридам относятся гиалуроновая кислота, хондроитинсерная кислота и гепарин. При гидролизе мукополисахариды распадаются на глюкозамин или галактозамин, ацетилглюкозамин или ацетилгалактозамин, глюкуроновую и серную кислоты. Гликопротеиды (муцины) встречается в секретах слизистых желез. Гликопротеиды нерастворимы в воде, хорошо растворяются в щелочах и осаждаются при подкислении.

1 Цель работы – выделить гликопротеид из слюны

2 Приборы и материалы

Уксусная кислота (конц.)

Слюна

3 Описание метода

В пробирку собирают 2 мл слюны и по каплям (4-5 капель) прибавляют концентрированную уксусную кислоту. Образуется осадок муцина, трудно растворимый в избыт­ке уксусной кислоты. Сгусток выделяют стеклянной палоч­кой, помещают в чистую пробирку и проводят реакцию Подобедова-Молиша.

3.4 Лабораторная работа 23. Нафтоловая проба на углеводную группировку гликопротеида (реакция Подобедова—Молиша)

Если к сгустку муцина добавить спиртовой раствор α-нафтола и смесь подслоить концентрированной серной кислотой, то на границе двух слоев жидкости появляется фиолетовое кольцо.

Реакция обусловлена присутствием в муцине углеводной простетической группы. При действии концентрированной серной кислоты из глюкозы образуется оксиметилфурфурол. Последний, конденсируясь с α-нафтолом, превращается в окрашенное соединение.

1 Цель работы – подтвердить химический состав сложного белка – муцина

2 Приборы и материалы

Спиртовой раствор α-нафтола 1 %

Серная кислота (конц.)

Муцин

3 Описание работы

К сгустку муцина (см. лабораторную работу 23) добавляют 1 – 2 капли 1 % раствора (спиртового) α-нафтола, перемешивают и по стенке осторожно спускают 10—20 капель концентрирован­ной серной кислоты. На границе двух слоев жидкости посте­пенно появляется фиолетово-красное кольцо, хорошо замет­ное на белом фоне.

4 Оформление результатов работы

Сформулируйте выводы по данной работе.

5 Контрольные вопросы

1. Строение гликопротеидов.

2. Принцип реакции, подтверждающей химический состав гликопротеидов.

Литература

1. Филлипович Ю.В., Егорова Т.А., Севастьянова Г.А. Практикум по обшей биохимии. – М.: Просвещение, 1982. – 311 с.

2. Кушманова О.Д., Ивченко Г.М. Руководство к практиче­ским занятиям по биологической химии. – М.: Медицина, 1974. – 424 с.

3. Добрынина Б.И., Свешникова Е.Я. Руководство к прак­тическим занятиям по биологической химии. – М.: Медицина, 1967. – 343 с.

4. Аналитическая химия. Физические и физико-химические методы анализа: Учебник для вузов / А.Ф. Жуков, И.Ф. Колосова, В.В. Кузнецов и др.; под ред. О.М. Петрухина. – М.: Химия, 2001. – 496 с.

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ 4

1. ХИМИЧЕСКАЯ ПРИРОДА БЕЛКА 4

1.1 Лабораторная работа 1. Биуретовая реакция 7

1.2 Лабораторная работа 2. Нингидриновая реакция на α-аминокислоты 9

1.3 Лабораторная работа 3. Реакция на первичную аминогруппу 12

1.4 Лабораторная работа 4. Реакция на тирозин (Миллона) 13

1.5 Лабораторная работа 5. Ксантопротеиновая реакция 14

1.6 Лабораторная работа 6. Реакция на гистидин (Паули) 16

1.7 Лабораторная работа 7. Реакция Фоля на серосодержащие аминокислоты 18

1.8 Лабораторная работа 8. Реакция на триптофан 19

1.9 Лабораторная работа 9. Реакция на аргинин (Сакагучи) 21

1.10 Лабораторная работа 10. Хроматографический метод определения аминокислот 22

1.11 Лабораторная работа 11. Количественное определение белка по биуретовой реакции 25

2 ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА БЕЛКОВ 27

2.1 Лабораторная работа 12. Осаждение белков солями щелочных и щелочноземельных металлов 28

2.2 Лабораторная работа 13. Осаждение белков органическими растворителями 29

2.3 Лабораторная работа 14. Осаждение белков солями тяжелых металлов 29

2.4 Лабораторная работа 15. Осаждение белков минеральными кислотами 30

2.5 Лабораторная работа 16. Осаждение белков органическими кислотами 31

2.6 Лабораторная работа 17. Осаждение белков при нагревании 32

2.7 Лабораторная работа 18. Количественное определение белка в культуральной жидкости 33

2.8 Лабораторная работа 19. Высаливание белков 35

3 СЛОЖНЫЕ БЕЛКИ 36

3.1 Лабораторная работа 20. Гидролиз нуклеопротеидов дрожжей 36

3.2 Лабораторная работа 21. Бензидиновая проба на геминовую группировку гемоглобина 39

3.3 Лабораторная работа 22. Выделение гликопротеида из слюны 40

3.4 Лабораторная работа 23. Нафтоловая проба на углеводную группировку гликопротеида (реакция Подобедова—Молиша) 40

ЛИТЕРАТУРА 41

Кафедра технологии микробиологического синтеза

Методические указания