2 Приборы и материалы

Водяная баня

Электроплитка

Триптофан

Белок 1 %

Гидролизат белка

Уксусная кислота (конц.)

Серная кислота (конц.)

3 Описание работы

В три пробирки наливают: в 1-ю – 2 мл раствора трип­тофана, во 2-ю – 10 капель 1% раствора белка, в 3-ю – 10 капель гидролизата белка. Во все пробирки приливают около 2 мл концентрированной уксусной кислоты. 2-ю и 3-ю пробирки нагревают. После охлаждения во все три пробир­ки наслаивают по 1 мл концентрированной серной кислоты. На границе двух жидкостей наблюдается образование крас­но-фиолетового окрашивания. При встряхивании вся жид­кость окрашивается в фиолетовый цвет.

4 Контрольные вопросы

1. В чем состоит принцип метода?

2. Для чего мы использовали уксусную кислоту?

1.9 Лабораторная работа 9. Реакция на аргинин (Сакагучи)

Белки в присутствии щелочи дают красное окрашивание с гипобромидом и α-нафтолом. Реакция обусловлена наличием в белке аминокислоты аргинина, имеющей в своем составе гуанидиновую группировку. Механизм реакции аргинина с α-нафтолом в присутствии окислителя еще полностью не выяснен. Вероятно, гуанидиновая группировка окисляется гипобромидом, и окисленный аргинин, соединяясь с α-нафтолом, образует продукт конденсации красного цвета:

1 Цель работы – провести качественную реакцию на аргинин

2 Приборы и материалы

Белок 1 %

Гидролизат белка

Аргинин

Гидроксид натрия 10 %

α-нафтол спиртовой раствор 0,1 %

Гипобромид натрия 2 %

3 Описание работы

В три пробирки наливают по пять капель 1 % раство­ра белка, по пять капель гидролизата белка и по пять капель раствора аргинина. Затем в каждую пробирку добав­ляют но пять капель 10% раствора гидроксида натрия, три кап­ли 0,1 % спиртового раствора α-нафтола и по каплям (все­го 1 – 5 капель) 2 % раствор гипобромида натрия. Жид­кость в пробирках становится красного цвета.

4 Контрольные вопросы

В чем состоит принцип метода?

5 Оформление результатов

Результаты девяти описанных лабораторных работ необходимо записать в виде таблицы (табл. 2), которая по­могает систематизировать материал и делает его более на­глядным.

Таблица 2 – Цветные реакции на белки

Название реакции	Материал исследова-ния	Используемые реактивы	Чем обусловлена реакция (принцип метода)	Результат (наблюда-емая окраска)	Что откры-вает данная реакция

1.10 Лабораторная работа 10. Хроматографический метод определения аминокислот

Существует несколько разновидностей хроматографиче­ского метода анализа. Для разделения аминокислот наибо­лее доступным и сравнительно точным является метод рас­пределительной хроматографии на бумаге.

Метод основан на различной растворимости отдельных аминокислот в двух частично смешивающихся жидкостях, одной из которых является вода, другой — водонасыщенный органический растворитель (фенол, смесь бутилового спирта с уксусной кислотой и др.).

Сущность метода заключается в том, что каплю смеси аминокислот или гидролизата белка наносят на полоску хроматографической бумаги, конец которой опускают в под­ходящий органический растворитель. Растворитель всасыва­ется хроматографической бумагой и увлекает за собой нанесенные на бумагу аминокислоты. Скорость перемещения аминокислот на бумаге зависит от химического строения аминокислот и их способности растворяться в подвижном и неподвижном растворителе. В качестве подвижного раство­рителя употребляют, например, водонасыщенный раствор фе­нола, бутиловый спирт, амиловый спирт и др. Неподвижным растворителем является вода, пары которой насыщают хроматографическую бумагу (внешне бумага остается сухой). Чем меньше растворимость аминокислот в воде и чем больше их растворимость в органическом растворителе, тем быстрее они движутся вслед за его фронтом.

Положение аминокислот на бумаге можно обнаружить при помощи цветной реакции с нингидрином. Реакцию про­водят путем опрыскивания из пульверизатора высушенной полоски бумаги 0,5 % спиртовым раствором нингидрина и последующим нагреванием в сушильном шкафу. Отдельные аминокислоты обнаруживаются в виде пятен, окрашенных в голубой, фиолетовый или оранжевый цвета (в зависимости от химической структуры аминокислоты). Основной физико-химической характеристикой хроматографического процесса является коэффициент распределения Kd.

Коэффициент распределения (Kd) характеризует распределение вещества между подвижной и неподвижной фазами при достижении равновесия в хроматографическом процессе. Определить Kd непосредственно из эксперимента (т.е. найти концентрацию соединения в подвижной и неподвижной фазе) довольно сложно. Поэтому в качестве основной характеристики удерживания вещества, определяющей положение его зоны на бумаге используется фактор Rf. Фактором Rf называют отношение расстояния (в мм) от места нанесения аминокислоты до середины ее пятна а к расстоянию (в мм) от места нанесения аминокислоты до фронта растворителя (в):

Rf=а/в

Фактор Rf является характерной вели­чиной для каждой аминокислоты и постоянен при данных условиях опыта (растворитель, температура, сорт бумаги и т. д.). Идентификация аминокислот на хроматограммах проводится путем использования чистых аминокислот - «свидетелей», наносимых на ту же хроматограмму.

Исследуемые растворы аминокислот наносят вблизи цент­ра бумажного диска, зажатого по краям. Смесь растворите­лей подводят к центру диска при помощи «ножек» из бума­ги. Проводят разделение смеси, состоящей из трех аминокис­лот.

1 Цель работы – провести разделение и идентификацию аминокислот методом бумажной хроматографии