Подготовка дафний к биотестированию.

30-40 дафний с выводковыми камерами, полными яиц и зародышей, за 3-4 суток до тестирования пересаживают в 1-2- литровые емкости (стаканы, кристаллизаторы) с аквариумной водой, в которую перед посадкой вносят корм. После появления молоди (каждая самка может выметать от 10 до 40 молодых дафний) взрослых особей удаляют при помощи стеклянной трубки, а однодневную молодь используют для биотестирования. Необходимое для тестирования одной пробы с одним контро­лем в трехкратной повторности потребуется 60 дафний ( в каждый сосуд для тести­рования помещают по 10 рачком).

Для более точных токсикологических опытов используют поколение от одной самки, чем обеспечивается генетическая однородность материала и максимально исключается возможность разброса полученных данных за счет индивидуальной изменчивости. 3-5 одновозрастных половозрелых самок отсаживают по одной в стаканы с водой на 200-250 мл, куда вносят корм. После появления молоди берут рачков 2-4 летнего возраста из стакана, в котором их появилось больше и переносят в емкость на 2-5 л , где производят дальнейшее культивирование. Для опытов используют второй помет. Плотность посадки такая же, как и для взрослых дафний (20-25 рачков на 1 л воды).

Подготовка воды

Для культивирования дафний, приготовления рабочих растворов, разведения сточной воды и для контроля рекомендуется вода средней жесткости(2,5-5,3 экв/л) с нейтральной реакцией среды(рН=7) из чистого пресного водоема. Воду наливают в стеклянный сосуд и выдерживают три дня при комнатной температуре, аэрируя при помощи аквариумного компрессора.

Водопроводная вода подвергается химической обработке- содержит коагулянты, свободный хлор и др. Для удаления хлора и других примесей, помимо отстаивания, воду надо пропустить через гранулированный активированный уголь, используя стеклянную широкогорлую трубку высотой в 1 м. После этого воду 2-3 суток аэрируют аквариумным компрессором. В воду можно культуру хлореллы или одноклеточных водорослей. Затем воду отстаивают, профильтровывают, выдержи­вают в аквариуме с рыбами. В результате получается вода удовлетворительного качества.

Проведение эксперимента и оценка результатов.

Наливают в химические стаканы сточную воду до прохождения через очист­ные сооружения и после (по 200 мл в трехкратной повторности). Контроль-очищенная или аквариумная вода. В каждый стакан помещают по 10 рачков в возрасте 2-4 суток. Для этого пипеткой с широким концом дафний отлавливают из сосуда, где они выращивались, и помещают на часовое стекло. Тонкой пи­петкой отсасывают воду со стекла и дафний смывают в приготовленный стакан, используя жидкость из этого же стакана. Дафний сначала помещают в кон­трольные, а затем в опытные стаканы, начиная с наименьшей концентрации. При проведении опыта их не кормят.

По истечении 1,2,4,8,24,48 часов снимают результаты опытов, учитывая при этом число живых особей, их поведение, степень наполнения кишечника пищей, количество сброшенных эфипиумов. Те животные, которые в течение нескольких секунд после легкого встряхивания стакана не начинают двигаться вновь, считаются погибшими, несмотря на то, что у них могут двигаться антен­ны.

При осмотре стаканов погибших дафний удаляют пипеткой, начиная с наи­менее концентрированного раствора, после чего пипетку тщательно моют. Для контроля должна быть отдельная пипетка.

Если гибель дафний в контроле превышает 10%, то опыт повторяют.

При отмирании 50% особей концентрация считаются сильно токсичной и обо­значается ЛК₅₀. При гибели 100% особей концентрация считается летальной (ЛК₁₀₀). Минимальная концентрация, при которой организмы не гибнут, обозна­чается ЛК₀.

Если за период наблюдений гибель дафний не наблюдается даже в неразбав­ленной воде, значит острой токсичностью она обладает. При гибели 20% особей концентрация уже считается вредной.

В результате опытов можно получить ответы на следующие вопросы:

1. Является ли испытуемое вещество или сточная вода остротоксичнцыми?

2. Каким должно быть разбавление сточной воды или какой должна быть кон­центрация вещества, чтобы исчезла острая токсичность