2. Нанесение неподвижной жидкой фазы на твердый носитель.

3. Заполнение колонки. При заполнении нижний конец колонки закрывают тампоном из стекловаты и присоединяют к водоструйному насосу. Затем насадку (сорбент) вносят небольшими порциями через воронку. После заполнения колонки ее верхний конец закрывают там­поном из стекловаты. Колонку устанавливают в термостате, не соеди­няя с детектором, и продувают при нагревании газом-носителем (ар­гон, гелий, азот), не превышая температуры, допустимой для данной неподвижной фазы. Наконец, колонку соединяют с детектором, не из­влекая ее из термостата хроматографа (из-за опасности окисления на­садки).

4. Разделение пробы.

5. Оценка результатов анализа.

Областями применения газовой хроматографии являются:

• анализ всех классов веществ, термически стабильных и способ­ных испаряться, не разлагаясь (в большинстве случаев нелетучие вещества могут быть получены в виде летучих производных);

• разделение и идентификация неорганических и органических веществ;

• исследование продуктов пиролиза высокомолекулярных веществ.

5. Колоночная жидкостная хроматография.

Метод колоночной жидкостной хроматографии впер­вые был предложен в 1906 г. как метод разделения смеси веществ, по­зволяющий осуществлять эту операцию как на микроуровне, так и при решении препаративных задач.

Неподвижную фазу помещают в колонку, затем вносят в нее ана­лизируемую смесь (биопробу) и элюируют соответствующим раство­рителем (подвижной фазой). При продвижении по колонке компоненты смеси по-разному удерживаются сорбентом в зависимости от своих физи­ко-химических свойств и, следовательно, перемещаются с разной ско­ростью. На выходе колонки разделяемые вещества появляются в опре­деленной последовательности и могут быть собраны в виде отдельных фракций.

В колоночной жидкостной хроматографии конечный результат зависит не только от того, на­сколько принцип разделения (адсорбция, распределение, ионообмен или гель-хроматография) соответствует свойствам анализируемых ве­ществ, но и от множества других факторов:

• свойств системы сорбент-элюент;

• условий элюирования (скорость потока, температура, вязкость элюента);

• конструкции и размеров колонки;

• нагрузки колонки (количество пробы);

• качества упаковки колонки;

• размеров частиц, среднего диаметра пор частиц сорбента;

• конструкции основных элементов хроматографической системы (блок ввода пробы, мертвый объем в соединительных шлангах и ячейке детектора);

• качества подготовки пробы.

Качество разделения (эффективность работы колонки) зависит так­же от равномерности ее упаковки и от скорости установления равнове­сия между актами адсорбции — десорбции вещества.

Основное преимущество колоночной жидкостной хроматографии перед газовой состоит в возмож­ности разделения веществ при более низких температурах (в диапазо­не от температуры замерзания до кипения растворителя), поэтому этот метод позволяет разделять термически неустойчивые вещества (напри­мер, белки), которые нельзя испарить без разрушения.