1. Подготовка биопробы в соответствии с методикой анализа.

2. Подготовка пластинки. В зависимости от назначения тонкослойной хроматографии (анализ или препаративное разделение) применяют пластинки со слоя­ ми сорбента различной толщины: пленки для количественного определения обычно имеют слой толщиной 0,1 или 1,3 мм, для препаративных целей — 0,5 и 2 мм. При необходимости сорбенты закрепляют на пластинках при помощи органических связующих материалов.

3. Подготовка хроматографической камеры. Обычно разделение проводят в среде, насыщенной парами элюента, поэтому в камеру, выложенную по стенкам фильтровальной бумагой, помещают элюент (высота слоя 1 см) и, покачивая камеру, смачивают листы бумаги.

4. Нанесение биопробы. Для отбора необходимого объема (1...5 мкл) капилляр погружают в раствор биопробы, избыток раствора уда­ляют с помощью фильтровальной бумаги. Затем капилляром осторож­но касаются слоя сорбента на стартовой линии, при контакте образуется круглое пятно (диаметр пятна не должен превышать 2 мм, так как при проявлении пластинки пятна размываются вследствие броуновско­го движения молекул вещества). Для отбора проб используют тонкие капилляры (с внутренним диаметром 0,5 мм), микрошприцы объемом 5...10 мкл, дозирующие шприцы с фиксированным объемом или специальные аппликаторы.

5. Проявление хроматограммы. В камеру помещают пластинку, причем стартовая линия не должна быть погружена в растворитель. По достижении фронтом растворителя высоты 10—15 см пластинку извлекают и отмечают положение фронта.

6. Удаление элюента с пластинки путем ее высушивания.

7. Детектирование (визуализация) результата. Большинство хи­мических соединений, входящих в состав биопроб, лишено окраски, поэтому для обнаружения компонентов на пластине используют раз­личные физические и химические способы их визуализации на основе химических реакций, а также явлений флуоресценции и абсорбции. В частности, многие ароматические вещества имеют собственную флуоресценцию при длине волны излучения 360 нм, что позволяет легко выявлять их. Абсорбция основана на том, что большинство готовых пластинок содержит люминофоры, поэтому при облучении УФ-светом с длиной волны 254 нм они светятся равномерным желто-зеленым фо­ном, а вещества, поглощающие в УФ-области, обнаруживаются в виде темных пятен на светлом фоне. Некоторые компоненты могут быть выявлены по своей способности вступать в реакции со специфически­ми реагентами с образованием окрашенных продуктов либо хромофо­ров. Необходимо отметить, что подобные методы носят качественный характер и поэтому используются преимущественно в препаративной тонкослойной хроматографии.

8. Количественная оценка результата.

9. Документирование результата.

Известны два варианта тонкослойная хроматографии, которые обладают рядом преимуществ перед другими и получили достаточно широкое распростране­ние в лабораторной практике — бумажная хроматография и двумерная хроматография.