1. Выводы.

Таким образом, можно сделать вывод, что все рассматриваемые фармакопеи для определения примесей используют метод ТСХ и ВЭЖХ. И действительно методы жидкостной и тонкослойной хроматографии, которые характеризуются высокой чувствительностью и объективностью, являются перспективными для контроля чистоты лекарственных средств.

Достоинства метода тонкослойной хроматографии.

1. Непревзойденная универсальность хроматографической системы:

• легкость смены растворителей для оптимизации селективности;

• неограниченный выбор растворителей (кроме случая использования обращенных фаз), поскольку на подбор растворителя не влияют особенности фонового отклика детектора:

• легкость смены разделяющей среды;

• качество слоев, используемых для элюирования в одном направлении, не может быть ухудшено остатками ранее наносимых образцов;

• практически нет проблем, связанных с необратимо адсорбированными веществами:

• нет зон, которые "не промываются".

2. Все компоненты образца остаются в слое сорбента (в ЖХ ничто не остается в колонке); полученное разделение образца легко оценивается визуально; упрощена проверка чистоты образца.

3. Обеспечивается возможность одновременного элюирования различными растворителями (до шести растворителей при элюировании по соседним дорожкам) и регулируемого воздействия газовой фазы на разделение; добиться изменения селективности можно за считанные секунды или минуты.

4. За счет подбора условий элюирования (хроматографического разделения) может быть оптимизирована разрешающая способность соответственно по одним лишь интересующим веществам; благодаря этому экономится время, затрачиваемое на анализ (поскольку не приходится дожидаться позднее элюируемых веществ, которые могут остаться на старте).

5. Возможность разделения многих образцов и многомерного элюирования при различных условиях.

6. Малая стоимость рутинного анализа из-за возможности разделения многих образцов (до 60) на одной пластинке; при благоприятных условиях продолжительность анализа может быть снижена до 5 с.

7. Возможность хранить пластинку с разделенными образцами и детектировать интересующие вещества позже (совершенно независимо от процедуры разделения); обе особенности весьма выгодны, поскольку не накладываются Ограничения по времени;

• результаты разделений, полученных с использованием ряда установок на различных рабочих местах, могут контролироваться одним регистрирующим прибором:

• любая конкретная тонкослойная пластинка может обследоваться столь долго, сколько потребуется, или столь быстро, насколько это позволяет детектор (и соответствующие электронные схемы);

• обеспечивается возможность многомерного обнаружения при последующей химической обработке пластинки;

• возможность повышения чувствительности обнаружения любым из разнообразных способов (например, проведение реакций для повышения способности к флуоресценции или к поглощению света);

• оптимального отклика на каждый компонент добиваются благодаря выбору соответствующей длины волны;

• пользование вычислительными машинами для оптимизации сигнала с детектора за счет усреднения сигнала, цифровой фильтрации, вычитания фона или корреляционного анализа (что совсем не осуществимо или крайне затруднено при регистрации компонентов, вымываемых по одиночке из колонки жидкостного хроматографа).

8. Благодаря тому, что большинство операций в системе для тонкослойной хроматографии выполняется вне зависимости от продолжительности перерывов между операциями, удается универсально планировать сроки выполнения различных работ (таких, как нанесение образца, подготовка слоя сорбента, элюирование и обнаружение).

9. В качестве сорбента можно применять целлюлозу.

Недостатки метода тонкослойной хроматографии

1. Ограниченная разрешающая способность из-за малой протяженности разделяющего участка (3-10 см) (исключением является случай разделения в камере, работающей под давлением).

2. Пока еще не удается полностью воспользоваться преимуществами сорбентов с обращенной фазой (наблюдаются затруднения, связанные с плохой смачиваемостью, с разложением состава подвижной фазы). Возникающие сложности могут быть частично преодолены благодаря техническим усовершенствованиям.

3. Во многих случаях чувствительность обнаружения ниже, чем в ВЭЖХ.

4. Поскольку для разделения используется "открытая" система, результаты зависят от окружающей среды (например, относительная влажность влияет на состояние гидрофильных слоев, что приводит к необходимости контроля влажности среды; поверхность пластинки способна улавливать загрязняющие вещества из воздуха, из-за чего могут искажаться количественные результаты, особенно в высокоэффективной тонкослойной хроматографии); осложнена работа с летучими образцами или с веществами, чувствительными к кислороду или к свету.

5. Для того, чтобы использовать в полной мере выгодные возможности и универсальность метода, необходимы некий минимальный уровень знаний, понимание основ и существенных особенностей тонкослойной хроматографии. Большинство людей, занимающихся анализом, старается не затруднять себя подобным освоением. Отсутствие контроля за относительно большим числом параметров приводит к невоспроизводимости результатов [9].

Для оценки чистоты все больше и больше применяется метод ВЭЖХ. Причины в ее несомненном преимуществе в сравнении с большинством методов. Прежде всего, следует назвать большой диапазон молекулярных масс веществ, с которыми можно работать: от нескольких единиц до десятков миллионов, что существенно шире, чем в газовой хроматографии. Кроме того, мягкость условий ВЭЖХ (почти все разделения можно проводить при температурах, близких к комнатной, при отсутствии контакта с воздухом) делает ее особенно пригодным, а зачастую единственным методом исследования лабильных соединений, в частности, биологически активных веществ и биополимеров. Эффективность разделения существенно превосходит достигнутую в газовой хроматографии (ГХ). Скорость анализа методом ВЭЖХ высокая: обычно разделение сложной смеси занимает несколько минут. ВЭЖХ является таким же точным количественным методом, как и ГХ. Метод ВЭЖХ дает возможность препаративно выделить из сложной смеси в мягких условиях чистые вещества, которые можно далее исследовать другими физико-химическими методами. Наконец, чувствительность, достигаемая в ВЭЖХ превосходит чувствительность в ТХ, а высокоселективные детекторы позволяют определять микроколичества веществ в сложных смесях [10, 11, 12].