Для нотаток

Підпис викладача:___________

Дом. завдання: “Кількісне визначення білка в сечі на ФЕКу”.

1. К.С.Плотнікова ” Практикум з клінічних лабораторних досліджень”с.107-112.

2. О.С.Манастирська “Клінічні лабораторні дослідження” с.61-62.

Навчальна практика №11

Дата:_________________

Тема: Кількісне визначення білка в сечі на ФЕКу.

Мета: Оволодіти методикою визначення кількості білка.

Література:

1. К.С.Плотнікова ” Практикум з клінічних лабораторних досліджень”с.107-112.

2. О.С.Манастирська “Клінічні лабораторні дослідження” с.61-62.

Знати: 1. Причини і види протеїнурій.

Уміти: 1. Готувати реактиви.

2. Працювати з ФЕКом і визначати кількість білка на ФЕКу.

3. Будувати калібрувальний графік.

4. Оцінювати результат.

ПЛАН:

1. Визначення наявності білка в сечі.

2. Визначення кількості білка в сечі на ФЕКу.

3. Оцінювання результатів.

Забезпечення заняття:

1. Посуд: пробірки хімічні, центрифугальні, піпетки мірні на 1мл, на 2мл, на 5мл, на 10мл, на 0,1 мл, на 0,2мл.

2. Реактиви: 3 % розчин сульфосаліцилової кислоти, 0,9% розчин хлориду натрію, 1% розчин альбуміну(стандарт), насичений розчин хлориду натрію, 20% сульфосаліцилова кислота, 50% нітратна кислота, реактив Ларіонової, дез.розчин.

3. Обладнання: ФЕК, штатив для пробірок, електроцентрифуга.

4. Досліджуваний матеріал: сеча з вмістом білку.

5. Темний папір.

Проведення поточного контролю теоретичних знань студента:

1. Чи є білок в сечі здорової людини?

2. Як називають появу білка в сечі?

3. Дати класифікацію протеїнурій.

4. Які причини виникнення ниркової фізіологічної протеїнурії?

5. Які причини виникнення ниркової органічної протеїнурії?

6. Які причини виникнення позаниркової протеїнурії?

7. Які методи визначення наявності білка в сечі?

8. На якій властивості білка базуються методи його визначення?

9. Як визначити наявність білка в сечі з 20% сульфосаліциловою кислотою?

10. Як визначити наявність білка в сечі пробою Геллера?

11. У якому випадку визначають кількість білка?

12. Який принцип методу Брандберга-Робертса-Стольникова?

13. Як визначити кількість білка в сечі за методом Брандберга-Робертса- Стольникова?

14. Як розрахувати кількість білка методом розведення?

Хід роботи:

I. Визначення наявності білка в сечі одним із методів. Визначити наявність білка в сечі за допомогою 20% сульфосаліцилової кислоти або проби Геллера.

2. Визначення кількості білка в сечі з 3% сульфосаліциловою кислотою на ФЕКу.

Принцип методу: При додаванні 3% сульфосаліцилової кислоти до сечі з наявністю білка відбувається згортання білка і утворюється каламутність, інтенсивність якої пропорційна кількості білка.

1. Досліджувану сечу процентрифугувати.

2. Взяти дві хімічні пробірки: перша - дослід ”Д”, друга - контроль ”К”.

3. Набрати в дві пробірки по 1,25 мл сечі.

4. В пробірку “Д” додати 3,75 мл 3% розчину сульфосаліцилової кислоти.

5. В пробірку “К” додати 3,75 мл фізіологічного розчину.

6. Вміст пробірок змішати.

7. Через 5 хвилин проводити вимірювання вмісту пробірки ”Д” на ФЕКу в кюветі на 5мм при червоному світлофільтрі проти контролю(вмісту пробірки ”К”).

8. Концентрацію білка визначити за допомогою заздалегідь побудованого калібрувального графіка, або за таблицею.

9. Схема визначення кількості білка в сечі на Феку:

Назва інгредієнтів	Дослід, мл	Контроль, мл
Досліджувана сеча	1,25	1,25
3% розчин сульфосаліцилової кислоти	3,75	-
0,9% розчин натрію хлориду	-	3,75

10. Занести результати в бланк аналізу.

ІІІ.Побудова калібрувального графіку.

1. Приготувати робочі розчини з 1% розчину альбуміну(стандартного розчину) за

таблицею.

№ пробір ки	1% розчин альбуміну, мл	Ізотонічний розчин натрію хлориду, мл	Концентрація білка (С), г/л	Об’єм розведеного розчину, мл	3% розчин сульфосаліцилової кислоти, мл	Екстинція (Е)
1.	0,05	9,95	0,05	1,25	3,75
2.	0,1	9,9	0,1	1,25	3,75
3.	0,2	9,8	0,2	1,25	3,75
4.	0,5	9,5	0,5	1,25	3,75
5.	1	9	1	1,25	3,75

2. Хімічні пробірки пронумерувати: 1, 2, 3, 4, 5.

3. З кожного одержаного розчину взяти в окрему хімічну пробірку по 1,25мл і додати по 3,75мл 3% розчину сульфосаліцилової кислоти.

4. Вміст пробірок перемішати.

5. Через 5 хвилин провести вимірювання на ФЕКу вмісту пробірок в кюветі на 5мм при червоному світлофільтрі проти контролю(3% розчин сульфосаліцилової кислоти).

6. Отримані результати (екстинцію) занести в таблицю.

7. На міліметровому папері побудувати калібрувальний графік. Накреслити вісь координат, на горизонтальній осі відмітити концентрацію розчинів, на

вертикальній - показники ФЕКу(екстинцію розчинів). З відміток по горизонтальній осі провести перпендикуляри, з відміток по вертикальній осі - провести лінію до перетину з перпендикулярами. Точки перетину з’єднати прямою( отримали калібрувальну криву). За калібрувальною кривою можливе визначення концентрації білка до 1г/л . При більш високих концентраціях білка вміст пробірки “Д” - дослід потрібно розвести і розведення врахувати при розрахунках.

4. Калібрувальний графік визначення кількості білка в сечі на ФЕКу, див. мал. 29 стор.109 у підручнику К.С. Плотнікова “ Практикум з клінічних лабораторних досліджень.”