Навчальна практика №12

Дата:______________

Тема:. Визначення наявності глюкози в сечі.

Мета: Навчитись виявляти глюкозу в сечі різними методами.

Література:

1. К.С.Плотнікова “Практикум з клінічних лабораторних досліджень”с. 113-114, 117.

2. О.С.Манастирська “Клінічні лабораторні дослідження” с.62-63.

Знати: 1. Поняття “глюкозурія” і “гіперглікемія”.

2. Зв’язок гіперглікемії і глюкозурії.

3. Причини виникнення фізіологічної та патологічної глюкозурії.

Уміти: 1. Готувати реактиви для дослідження.

2.Визначати наявність глюкози в сечі різними методами.

ПЛАН:

1. Визначення наявності глюкози в сечі пробою Гайнеса-Акімова.

2. Визначення наявності глюкози в сечі глюкозооксидазним методом.

3. Визначення наявності глюкози в сечі експрес-тестами.

Забезпечення заняття:

1. Посуд: хімічні пробірки, мірні циліндри на 500мл, 200мл, колба мірна на 100мл,піпетки пастерівські, мірні піпетки на 0,1 мл; 1мл; 5мл.

2. Реактиви: 13,3 г Cu S0₄ ; 50 г КОН, 50,0 г гліцерину, 1,5 л води очищеної, набір реактивів для глюкозооксидазного методу, дез.розчини.

3. Обладнання: електроцентрифуга, водяна баня, “Глюкотест” та різні експрес- тести, термостат.

Проведення поточного контролю теоретичних знань студента:

1. Скільки глюкози в нормі в крові?

2. Який нирковий поріг глюкози ?

3. Що таке “гіперглікемія”?

4. Що таке “глюкозурія” ?

5. Який існує зв’язок між гіперглікемією і глюкозурією?

6. Коли спостерігається фізіологічна глюкозурія ?

7. Коли спостерігається патологічна глюкозурія ?

ХІД РОБОТИ:

І. Проба Гайнеса.

Принцип методу: Здатність глюкози при нагріванні в лужному середовищі відновлювати оксид міді (синього кольору) в гідрат закису міді (жовтого кольору) і в закис міді (оранжевого-червоного кольору).

1. Приготування реактиву Гайнеса:

1розчин: 13,3 х.ч. сульфату міді + 400мл очищеної води.

2. розчин: 50,0 гідроксиду калію + 400мл води очищеної води.

3. розчин: 15,0 гліцерину + 200мл очищеної води.

Змішати перший і другий розчин, і влити у третій. Добре перемішати. Реактив можна довго зберігати у посуді з темного скла.

2.В хімічну пробірку внести 4мл реактиву Гайнеса та 8-12 крапель досліджуваної сечі.

3.Довести на водяній бані до кипіння.

4.Оцінити результат: при наявності глюкози рідина може мати такий колір: зеленуватий, жовтий, червоний, коричнево-зелений, а при відсутності глюкози - без змін (синій колір).

2. Визначення наявності глюкози в сечі глюкозооксидазним методом.

Принцип методу: Визначення глюкози полягає на реакції, яку каналізує глюкозооксидаза: Глюкозооксидаза

Глюкоза + 0₂ -------------------------------------► глюколактон + Н₂ 0₂

Утворений в ході реакції пероксид водню, під дією пероксидази, окиснює хромогенні субстрати з утворенням забарвленого продукту.

1. Приготувати робочий реактив.

Одну таблетку ферментно-хромогенної суміші внести в мірну колбу на 100мл, додають 70мл дистильованої води, розчинити при безперервному перемішуванні і довести до мітки очищенню водою. Отриманий розчин ферментно-хромогенної суміші (робочий реактив) можна зберігати в посуді з темного скла при температурі 2-8°С протягом 7 діб при умові герметизації флакона.

2. До робочого розчину реактиву (0,3 мл) додати 0,01 мл сечі.

3. Суміш інкубувати 15-20 хвилин.

4. Проби сечі, які викликають почервоніння реакційної суміші, рахувати позитивними на вміст глюкози.

5. Замалювати результат.

2. Визначення наявності глюкози в сечі експрес-тестами (“Глюкотест”, “Глюкофан”)

Принцип методу: При окисленні глюкози в присутності фермента глюкозооксидази утворюється пероксид водню, який розкладається ферментом пероксидазою і окиснює доданий барвник (ортотолуїдин, бензидин).Зміна кольору свідчить про наявність глюкози в сечі. В основі визначення лежить реакція:

Глюкозооксидаза

Глюкоза + 0₂ ----------------------------------► глюколактон + Н₂ 0₂

1. З упаковки витягнути папірець, який має світло-жовту поперечну смужку, оброблену розчином ферментів (глюкозооксидаза і пероксидаза) і барвника.

2. Індикаторну смужку змочити досліджуваною сечею.

3. Змочений папірець покласти на пластикову смужку і залишити на 2 хвилини.

4. Після цього порівняти забарвлення смужки з кольоровою шкалою. При наявності глюкози (0.1-2% і більше) колір смужок змінюється від світло-зеленого до інтенсивного зеленого.

5. Замалювати результат.

Для нотаток

Підпис викладача:___________

Дом. завдання: “Визначення кількості глюкози в сечі на ФЕКу”

1. К.С.Плотнікова ” Практикум з клінічних лабораторних досліджень”с.114-117.

2. О.С.Манастирська “Клінічні лабораторні дослідження” с.63-64.