Навчальна практика №13

Дата: ________________

Тема: Визначення кількості глюкози в сечі на ФЕКу.

Мета: Навчитись визначати кількість глюкози в сечі на ФЕКу.

Література:

1. К.С.Плотнікова “Практикум з клінічних лабораторних досліджень”с. 114-117.

2. О.С.Манастирська “Клінічні лабораторні дослідження” с.63-64.

Знати:

1. Методи визначення наявності глюкози в сечі.

2. Методи визначення кількості глюкози в сечі.

Уміти:

1. Готувати реактиви для дослідження.

2. Визначати кількість глюкози в сечі.

ПЛАН:

1. Визначення кількості глюкози в сечі.

Забезпечення заняття:

1. Посуд: серологічні пробірки, колба мірна на 100мл, мірні піпетки на 0,1 мл; 1мл; 2мл.

2. Реактиви: вода очищена, набір реактивів для глюкозооксидазного методу.

3. Дез.розчин.

4. Обладнання: ФЕК, термостат.

Проведення поточного контролю теоретичних знань студента:

1. Які є методи визначення наявності глюкози в сечі?

2. Як визначити наявність глюкози в сечі за методом Гайнеса?

3. Як визначити наявність глюкози в сечі експрес-тестами?

4. Як визначити наявність глюкози в сечі глюкозооксидазним методом?

5. Які є методи визначення кількості глюкози в сечі?

ХІД РОБОТИ:

Визначення кількості глюкози в сечі глюкозооксидазним методом на ФЕКу.

Принцип методу: Визначення глюкози полягає на реакції, яку каталізує глюкозооксидаза: Глюкозооксидаза

Глюкоза + О₂-----------------------------► глюколактон + Н₂О₂

Утворений в ході реакції пероксид водню, викликає окиснення субстратів пероксидази з утворенням забарвленого продукту. Збільшення оптичної густини розчину пропорційне концентрації глюкози.

І. Приготування робочого реактиву.

Одну таблетку ферментно-хромогенної суміші внести в мірну колбу на 100мл, додають 70мл дистильованої води, розчинити при безперервному перемішуванні і довести до мітки очищенню водою. Отриманий розчин ферментно-хромогенної суміші (робочий реактив) можна зберігати в посуді з темного скла при температурі 2-8°С протягом 7 діб при умові герметизації флакона.

2. Визначення наявності глюкози в сечі (якісна реакція):

1. До робочого розчину реактиву (0,3 мл) додати 0,0Імл сечі.

2. Суміш інкубувати 15-20 хвилин.

3. Проби сечі, які викликають почервоніння реакційної суміші, рахувати позитивними на вміст глюкози.

III. Визначення кількості глюкози в сечі:

1. Сечу розвести в залежності від якісної реакції в 2-10 разів.

2. Схема визначення.

Реагенти, мл	Контрольна проба, мл	Стандартна проба, мл	Дослідна проба, мл
Стандартний розчин	-	0,025	-
Дослідна проба (сеча)	-	-	0,025
Робочий реактив	2,0	2,0	2,0
Дистильована вода	0,025	-	-

3. Проби ретельно перемішати і інкубувати не менше 20хв при 37°С,або 30хв при 15-25°С.

4. Через 5-10хв після початку інкубації пробірки інтенсивно струсити.

5. Після закінчення інкубації виміряти оптичну густину дослідних і стандартних проб при (490-540нм) зеленому світлофільтрі у кюветі на 5мм відносно робочого реактиву.

6. Розрахувати концентрацію глюкози за формулою:

Ед.

С = х С_ст,

Ест.

де, С - концентрація глюкози, ммоль/л;

Ед. - оптична густина дослідної проби (екстинція);

Е_ст. - оптична густина стандартної проби (екстинція);

С_ст. - концентрація глюкози в стандарті (10 ммоль/л).

7.Занести результати в бланк аналізу.