XII. Регистрация результатов исследования

Результаты бактериоскопического исследования отражаются в двух документах: в лабораторном регистрационном журнале учета микроскопических исследований и на специальных бланках, на которых результаты исследования сообщаются в лечебное учреждение, направившее материал на исследование (Приложение5). Результаты микроскопии следует отослать как можно быстрее, желательно в течение 24 часов с момента получения проб мокроты. В бланке ответа должны быть приведены следующие сведения:

• паспортные данные пациента;

• наименование учреждения исполнителя и отправителя;

• характеристика качества материала;

• использованный метод окраски и микроскопии;

• количество КУМ в мазке;

• выявление больших скоплений КУМ, что может свидетельствовать о гораздо большем количестве микобактерий, чем указано в заключении;

• дата исследования и фамилия сотрудника, проводившего исследование.

Результат следует отправлять в медицинское учреждение, приславшее пробы. Никогда не ограничивайтесь выдачей результата пациенту.

Мазок с обнаруженными КУМ является документом, от которого зависит постановка диагноза туберкулеза легких у конкретного человека. Его следует хранить в лаборатории, а результаты необходимо подтвердить повторным исследованием.

Положительные мазки помещают в специальный ящик и хранят в течение года. Затем мазки обеззараживают погружением в дезраствор, кипячением или автоклавированием и вывозят на свалку.

10% отрицательных мазков хранят в лаборатории в течение года, с тем, чтобы при необходимости провести проверку достоверности результатов. После этого их можно уничтожить.

XIII. Метод люминесцентной микроскопии

При люминесцентной микроскопии объекты (бактериальные клетки), окрашенные специальными красителями (флуорохромами), под действием облучения их ультрафиолетом испускают излучение в виде спектра света. По сравнению с методами обычной микроскопии исследования в свете люминесценции обладают рядом преимуществ: цветное свечение, высокая степень контрастности светящихся объектов на темном фоне, значительно большая площадь поля зрения.

При люминесцентной микроскопии используется специальный люминесцентный микроскоп с набором объективов и окуляров, позволяющих получить увеличение объекта наблюдения в пределах 250х - 630х. Необходимо использовать объективы предназначенные для люминесцентной микроскопии.

Источником света в люминесцентном микроскопе служит кварц-галогеновая или ртутная лампа. Для красителей системы аурамин/родамин используют подборку из следующих фильтров: (для микроскопа ЛОМО)

• возбуждающий фильтр ФС-1-4;

• запирающий фильтр С3С21-2;

• нейтральный фильтр БС 8-3.

Источник света должен содержать в своем спектре длину волны, возбуждающую молекулы красителя, а светофильтры подбираются таким образом, чтобы добиться хорошего расхождения между длинами волн возбуждающего ультрафиолетового света и излучения, испускаемого возбужденными объектами.

Люминесцентные красители (аурамин ОО, родамин С и др.) связываются с воскоподобными структурами микробной клетки. При облучении окрашенных бактериальных клеток возбуждающим источником света (определенный спектр ультрафиолетового излучения) они начинают светиться оранжевым или ярко-желтым светом на черном или темнозеленом фоне. За счет свечения вокруг клетки образуется ореол, благодаря которому видимые размеры светящейся клетки превышают ее нативные размеры.

Окрашенные флуорохромными красителями препараты исследуются при увеличении 250х – 450х, тогда как окрашенные фуксином – при увеличении 800х – 1000х, что позволяет видеть в 4-10 раз большее поле зрения и существенно сокращает время просмотра мазка.

Если микроскопическое исследование определенной площади мазка при окраске по Ziehl – Neelsen продолжается приблизительно 10-13 минут, то для исследования той же площади мазка методом люминесцентной микроскопии потребуется только 2-3 минуты. Наряду с этим при люминесцентной микроскопии отмечается большая резкость и контрастность микроскопической картины, что значительно облегчает обнаружение флюоресцирующих оранжевых или ярко желтых микобактерий на темном фоне (при гашении фона метиленовым синим или перманганатом калия). Указанные преимущества люминесцентной микроскопии наиболее выражены при исследовании олигобацилярного материала и в лабораториях, выполняющих ежедневно большое количество исследований (30 и более). Мазки для люминесцентной микроскопии необходимо готовить из осадка после обработки материала детергентом с последующим отмыванием и центрифугированием. Затем осадок нейтрализуют несколькими каплями 6% раствора соляной кислоты или 6% едкого натра (в зависимости от метода обработки материала), тщательно встряхивают и с помощью бумажной индикаторной полоски определяют уровень рН осадка. Перед нанесением материала осадка на предметное стекло необходимо добиться нейтрального значения рН (6,8-7,0). Во всех сомнительных случаях микроскопической картины мазки, которые использовались для флуоресцентной микроскопии, можно повторно окрасить по методу Ziehl – Neelsen.