- •Утверждено
- •II. Показания к применению метода
- •III. Возможности метода микроскопического исследования при выявлении кислотоустойчивых микобактерий
- •IV.Сбор диагностического материала
- •V. Организация рабочего места и оборудование, необходимое для микроскопических исследований
- •VI. Транспортировка диагностического материала
- •VII. Правила работы с диагностическим материалом
- •7.1 Прием диагностического материала
- •VIII. Приготовление мазков для микроскопических исследований
- •8.1. Подготовка предметных стекол
- •8.2. Приготовление мазков из нативного материала
- •8.3. Приготовление мазка из осадка необработанного нативного материала
- •8.4. Фиксация мазков
- •IX.Методы окраски диагностических препаратов
- •9.1. Окраска препаратов для световой микроскопии по методу Ziehl–Neelsen
- •9.2. Оборудование и реактивы для окраски по методу Ziehl–Neelsen
- •Процедура окраски.
- •X.Техника микроскопического исследования препарата
- •XI. Учет и интерпретация результатов микроскопического исследования
- •XII. Регистрация результатов исследования
- •XIII. Метод люминесцентной микроскопии
- •13.1. Метод окраски аурамином оо и родамином с
- •13.2. Метод окраски аурамином о
- •XIV. Причины возможных ошибок при выполнении микроскопических исследований
- •14.1. Ложноположительные результаты могут быть обусловлены следующими причинами:
- •14.2. Ложноотрицательные результаты могут быть обусловлены следующими причинами:
- •Возможные причины неисправностей при проведении микроскопии и способы их устранения
- •XV. Контроль и обеспечение качества микроскопического выявления кислотоустойчивых микобактерий
- •XVI. Меры безопасности при работе с инфекционным материалом
- •Правила сбора мокроты.
- •Направление на бактериоскопическое исследование
- •Лабораторный журнал регистрации результатов бактериоскопических исследований
- •Перечень лабораторного оборудования, расходных материалов, реактивов и инструментария для бактериоскопических исследований.
- •Результаты бактериоскопического исследования
- •Форма для оценки работы лаборатории при внешнем контроле качества
- •Расчет числа ложноположительных и ложноотрицательных результатов.
VII. Правила работы с диагностическим материалом
7.1 Прием диагностического материала
Микроскопическое исследование проводится только при наличии письменного направления на исследование.
Прием диагностического материала производится на отдельном столе с соблюдением следующих правил:
прием поступающих проб и их осмотр следует проводить (по возможности) в одноразовых перчатках и масках;
перед тем, как открыть транспортный контейнер необходимо протереть его наружную поверхность тампоном, смоченным дезинфицирующим средством (например, 5% раствором фенола);
аккуратно открыть крышку контейнера и проверить нет ли на поверхности флаконов следов протечки материала. Ни в коем случае не использовать поврежденные флаконы (разбитые или с трещинами) - уничтожить их (автоклавированием или кипячением) и запросить новый образец;
проверить наличие этикеток на боковой поверхности флакона в случае централизованной доставки материала;
проверить наличие идентификационного номера маркировки на флаконах с материалом и их соответствие номеру указанному в сопроводительном листе;
продензифицировать внутреннюю поверхность транспортировочного контейнера;
после работы с флаконами уничтожить одноразовые перчатки и вымыть руки с мылом;
выдать обменную стерильную посуду;
подписать сопроводительные документы;
занести в регистрационный лабораторный журнал сведения о каждом пациенте и полученном от него материале;
бланки направления на исследование хранятся отдельно от полученного материала;
бланки направлений следует подвергнуть стерилизации в сухожаровом шкафу в течение 30 минут при 85°С или (при отсутствии шкафа) прогладить горячим утюгом.
VIII. Приготовление мазков для микроскопических исследований
На практике используются 2 метода микроскопического исследования:
метод прямой микроскопии, когда мазок приготавливается непосредственно из необработанного диагностического материала или его осадка, если материал жидкий;
метод микроскопии мазка из осадка материала, подготовленного для культурального исследования путем обработки гомогенизирующими средствами и последующего центрифугирования.
Первый метод применяется в клинико-диагностических лабораториях общей лечебной сети, в которых производится только микроскопическое исследование с последующей окраской по методу Ziehl-Neelsen и исследование в световом микроскопе. Однако этот метод менее информативен, чем микроскопия осадка, так как при подготовке осадка происходит его “обогащение” за счет освобождения микробов из окружающей их слизи и осаждения их при центрифугировании. Окраску люминесцентными красителями рекомендуется применять преимущественно при исследовании мазков, приготовленных из осадка материала, обработанного детергентами и муколитическими средствами. Качественная и эффективная окраска флюорохромными красителями требует обязательного соблюдения кислотности (рН) мазка, а также освобождения микобактерий от окружающей их слизи, которая препятствует проникновению красителя в микробную клетку. Несоблюдение этих условий приводит к снижению эффективности люминесцентной микроскопии.
Приготовление мазков для микроскопического исследования является весьма ответственной процедурой, во многом предопределяющим успех исследования. При этом необходимо иметь в виду, что возбудитель туберкулеза распространяется преимущественно воздушно-капельным путем в составе аэрозольных частиц, диаметр которых составляет 1-5 мкм. Для предупреждения случаев внутрилабораторного заражения необходимо свести к минимуму возможность образования аэрозолей. Для защиты персонала лабораторий от инфицирующих частиц нужна хорошая вентиляция помещения лаборатории, защитная одежда, маски и неукоснительное соблюдение техники безопасности выполнения лабораторных процедур.
