8.1. Подготовка предметных стекол

Процедура приготовления мазка начинается с подготовки предметных стекол. Необходимо использовать только одноразовые новые отмытые, обезжиренные в спирте или смеси Никифорова (96° этиловый спирт + эфир в соотношении 1:1) стекла без царапин и сколов. При повторном использовании стекол, они могут быть недостаточно хорошо отмыты от предыдущего материала, что может привести к получению ложноположительных результатов. Стекла должны соответствовать ГОСТу.

Новые предметные стекла для очистки кипятят в 1% растворе питьевой соды в течение 15 минут, после чего промывают водой, затем в 1% растворе соляной кислоты и снова проточной водой, затем протирают насухо. Для обезжиривания вымытые стекла хранят в стеклянных банках с притертой пробкой в 96-градусном этиловом спирте или смеси Никифорова. Стекла должны подвергаться обезжириванию не менее 24-48 часов. Непосредственно перед приготовлением мазков стекла повторно протираются насухо.

Стекло подписывается тушью или восковым карандашом. Номер, проставленный на стекле, должен соответствовать номеру исследования в лабораторном регистрационном журнале при приеме материала. Не следует касаться чистой поверхности стекла руками или перчатками.

8.2. Приготовление мазков из нативного материала

Микобактерии чаще обнаруживаются в плотных гнойных комочках мокроты. Результат исследования в большой степени зависит от правильного выбора этих гнойных комочков.

Флакон (плевательницу) открывают медленно и аккуратно, избегая разбрызгивания мельчайших заразных капелек (аэрозоля мокроты). Можно гомогенизировать мокроту с использованием встряхивателя в течении 30 минут.

Если материал поступил в емкости, в которой невозможно обнаружить и выбрать частицы для приготовления мазка, его переносят в чашку Петри, под дно которой подложена черная бумага. При этом проявляют известную осторожность, чтобы избежать образования аэрозолей.

При приготовлении мазков наиболее удобно пользоваться деревянной палочкой, которую разламывают пополам перед работой. Забор комочков производят с помощью сломанных концов палочки, что обеспечивает последующее их нанесение на поверхность предметного стекла и приготовление мазка посредствам растирания. Использованные для приготовления мазка палочки удаляют в банку с дезинфицирующим раствором или в контейнер с отработанным заразным материалом.

Обожженной в пламени спиртовки и охлажденной бактериологической петлей или сломанными концами деревянной палочки (новой для каждой порции мокроты) захватывают небольшое количество мокроты с гнойными комочками. Гнойный комочек мокроты распределяют в центре на поверхности предметного стекла как можно более тонким слоем на площади приблизительно 1смх 2см в виде овала. Ограниченная площадь мазка обеспечивает безопасность манипуляции и последующей микроскопии, так как периферические части предметного стекла остаются незагрязненными инфекционным материалом. Мазок должен быть достаточно тонким, так как в противном случае он может быть смыт с предметного стекла при окраске. Толщина мазка в высушенном неокрашенном состоянии должна быть такой, чтобы можно было прочитать газетный шрифт, расположенный позади стекла на расстоянии 5-10 см. Если мазок слишком тонкий и содержит мало материала при микроскопическом исследовании можно получить ложноотрицательный результат. На одно предметное стекло наносится только один мазок. Если мокрота очень вязкая, небольшой гнойный комочек захватывают пинцетом, осторожно, отрезают ножницами и наносят его на середину предметного стекла.

Пинцет и ножницы обжигают в пламени горелки. Из очень вязких образцов мокроты частицы можно извлекать также с помощью второй обожженной петли.

Приготовление мазков для микроскопического исследования является одной из самых опасных процедур, во время которой происходит рассеивание аэрозолей содержащих возбудитель. В случае, когда мазок готовят с помощью бактериологической петли, необходимо обжигать петлю после каждой манипуляции в пламени спиртовой горелки до тех пор, пока она не станет красного цвета. Перед обжиганием крупные частицы мокроты нужно удалить с петли путем 2-3-х кратного погружения ее во флакон с отмытым речным песком, залитым 70°-ным спиртом, покрывающем песок не менее чем на 3см. Если песок и спирт находятся во флаконе емкостью 300-500мл с завинчивающейся крышкой, флакон можно использовать долгое время, периодически обновляя раствор спирта. Чтобы предупредить разбрызгивание заразного материала при обжигании петли, рекомендуется нагревать ее начиная с конца, впаянного в держатель постепенно передвигая в пламени до появления дыма на ее загнутом кончике. После этого петлю можно прокалить в вертикальном положении до покраснения.

Перед повторным использованием петлю тщательно прокаливают в пламени горелки, которое при этом должно быть бесцветным или голубым. Оранжевый или красный цвет пламени свидетельствует о недостаточном прожигании бактериологической петли.