«Виділення та якісне визначення складу нуклеопротеїдів»

Мета заняття: вивчити, з яких компонентів складаються нуклеопротеїди.

План заняття

1. Провести гідроліз дріжджів.

2. Виявити у гідролізаті дріжджів наявність вуглеводів, фосфо-ру, пептидних зв’язків.

1. Виявлення наявності вуглеводів, фосфору і пептидних зв’язків у гідролізаті нуклеопротеїдів дріжджів

Дослідження складу нуклеопротеїдів виконується після їх гідролізу, в результаті якого від білків відокремлюється компоненти нуклеїнових кислот. У гідролізаті можна виявити наявність поліпептидів (джерелом є білки нуклеопротеїдів), вуглеводи і фосфорну кислоту (джерело – нуклеїнові кислоти).

Одержання гідролізату дріжджів: 5 г дріжджів кладуть до ступки, додають 10 крапель діетилового ефіру, 10 крапель води. Додають щіпку піску і ретельно розтирають до утворення гомогенату, приливають 30 мл розчину гідроксиду натрію і розтирають протягом 15 хв. потім центрифугують вміст ступки; осад, що випав, використовують для реакції гідролізу, який здійснюють шляхом кип’ятіння з 5 % сірчаною кислотою протягом 1 години. В результаті цього утворюються низькомолекулярні поліпептиди, пуринові основи, пентози і фосфорна кислота.

А. Виявлення наявності поліпептидів у гідролізаті дріжджів за допомогою біуретової реакції

Об’єкт дослідження: Гідролізат дріжджів.

Обладнання і посуд: 1. Нагрівальний прилад;

2. Штатив із пробірками.

Реактиви: 1. NaOH, 10 %-й розчин;

2. CuSO₄, 5 %-й розчин.

Техніка виконання роботи

У пробірку наливають 1 мл гідролізату, додають 1 мл 10 %-го розчину NaOH і 0,5 мл 5 %-го розчину сірчанокислої міді. Спостерігають появу фіолетового забарвлення, що свідчить про наявність пептидних зв’язків.

В. Проба Троммера на рибозу і дезоксирибозу, які містяться у гідролізаті дріжджів

Об’єкт дослідження: Гідролізат дріжджів.

Обладнання і посуд: 1. Нагрівальний прилад;

2. Штатив із пробірками.

Реактиви: 1. NaOH, 10 %-й розчин;

2. CuSO₄, 5 %-й розчин.

Техніка виконання роботи

У пробірку наливають 1 мл гідролізату, додають 0,5 мл 10 % -го розчину їдкого натру і 5 крапель 5 %-го розчину сірчанокислої міді. Суміш перемішують і підігрівають до кипіння. Спостерігають появу жовтого забарвлення, яке свідчить про утворення гідроксиду міді. Він при тривалому нагріванні перетворюється на оксид міді цеглисто-червоного кольору.

С. Молібденова проба на фосфорну кислоту

Об’єкт дослідження: Гідролізат дріжджів.

Обладнання і посуд: 1. Нагрівальний прилад;

2. Штатив із пробірками.

Реактиви: Молібденовий реактив.

Техніка виконання роботи

У пробірку наливають 1 мл гідролізату, додають 1 мл молібденового реактиву і кип’ятять декілька хвилин. Спостерігають появу жовтого осаду фосфомолібденовокислого амонію.

Контрольні запитання

1. Що таке нуклеопротеїни, який їхній склад і біологічне значення?

2. Яка будівля ДНК? Розповісти про її значення.

3. Назвіть особливості будівлі і функції різних видів РНК.

4. Напишіть формули пуринових і пиримідинових основ.

5. Напишіть мононуклеотиди ДНК, з'єднаєте їх між собою.

6. Напишіть пари азотистих основ – аденін-тимін, гуанін-цитозин, з'єднайте водневими зв'язками.