17. Общая схема определения количества мезофильных аэробных и факультативно анаэробных м/о методом культивирования.
Для определения мезофильных аэробных м/о проводят посев м/о на поверхность агаризирован. питательной среды в чашках Петри.
Посев можно проводить петлей или стеклянным шпателем. При посеве отбирают клетки м/о с агаризированной или жидкой питат. среды, приоткрывают крышку чашки Петри и на поверхности среды проводят штрихи. Чашку закрывают и ставят крышкой вниз. Штрихи могут быть обычными или исчерпывающими. Исчерпывающий метод: механическое разделение клеток м/о на поверхности агаризированной питат. среды. Петлей отбирают небольшое кол-во культуры и проводят высев параллельными штрихами на поверхность агазир. питат. среды в чашках Петри. Петлю обжигают, если она остынет, проводят ею несколько штрихов перпендикулярно первым. Петлю стерилизуют и наносят штрихи в направлении, перпендикулярном предыдущему посеву.
При посеве м/о с жидкой питат. среды на поверхность агаризированной среды в чашке Петри шпателем действуют таким образом. Приоткрывают крышку чашки Петри и на поверхность среды наносят пипеткой на 0,1 мл разведенную культуру, которую круговыми движениями шпателя размещают по всей поверхности. Для этого м-да часто надо делать серийные разведения суспензий м/о так, чтобы на поверхности среды в чашке Петри выявилось 100-300 колоний, каждая из кот. получается в результате размножения одной исходной клетки.
Разведение готовят в физ. р-ре (ФР), шаг разведения 10 или 100. Для приготовления разведений с шагом 10 стерильный ФР разливают по 4,5 мл в пробирки. Затем в первую пробирку вносят 0,5 суспензии м/о – это первое разведение. Содержимое пробирки перемешивают, новой пипеткой отбирают 0,5 мл этой суспензии и переносят в др. пробирку с 4,5 мл ФР и т.д. Для приготовления разведений с шагом 100 делают те же действия, только смешивают ФР с клетками в пропорциях 9,9 мл ФР + 0,1 мл суспензии клеток. Степень разведения зависит от плотности доследуемой популяции м/о.
Для определения факультативно анаэробных м/о проводят глубинный посев м/о в агаризирован. питательную среду.
Для этого агаризированную среду предварительно разливают в пробирки по 15-20 мл и стерилизуют. Перед посевом пробирки помещают в кипящую водяную горелку, чтобы среду расплавить. Затем пробирки переносят в ультротермостат при 450С на 10 мин для охлаждения питательной среды. В каждую пробирку вносят пипеткой 0,1 мл разведенной жидкой культуры м/о. Содержимое пробирки перемешивают, выливают в чашку Петри. После застывания среды чашку помещают в термостат.
18.Характеристика бактерий группы кишечной палочки. Общая схема определения количества бгкп.
БГКП объединенное название и родов палочковидных бактерий, живущих в кишечнике ( полочки составляют 95% миклофлоры кишечника).
Обнаружение:
- в сырье: свидетельствует о фекальном загрязнении
- в продукте: плохое санитарно-гигиеническое состояние оборудования.
Идентификация БГКП:
●посев в среду Кесслера: идентификация по газообразованию (всплывающих поплавков) и изменению цвета среды (помутнение среды, синий цвет).
● посев на среду Энда:
●идентификация на среде Козера: в качестве углеводов лимонная кислота.Титратный тест. В результате изменяется рН среды, краситель меняет свой тест. М/о титрат(+) меняют цвет. М/о титрат(-) не меняют цвет.
Титр определяют по количеству положительных проб в 3 пробирках.