1.Підготувати спектрофотометр до роботи.

Підготовка спектрофотометра до роботи в УФ-ділянці спектру й вимірювання оптичиної щільності виготовлених зразків білка при 280 нм. При підготовці спектрофотометра до роботи і виконанні вимірювань керуватися інструкцією, доданою до приладу

2.Порядок проведення аналізу

а) Виготовлення зразків з відомою кількістю білка.

Поставити в штатив дев'ять пробірок. У першу налити 10 мл розчину хлориду натрію, 0,15 міль/л, і внести 10 міліграм высокоочищенного контрольного білка, заздалегідь перевіривши його на розчинність. З другої по дев'яту пробірки налити по 5 мл хлориду натрію, 0,15 міль/л. Градуйованою піпеткою перенести 5 мл розчину білка з першої пробірки в другу, перемішати, потім помістити 5 мл отриманого зразка в наступну пробірку і так далі. У дев'яту пробірку (контроль) зразок не вносити.

б) Підготувати дослідні зразки до вимірювання

З допомогою гомогенізатора подрібнити шматочок (15-20 г) дослідного продукту. Перенести подрібнений матеріал у хімічну склянку. Залити 50 мл фізіологічного розчину. Витримати 10 хв. Розчин зібрати градуйованою піпеткою у чисту хімічну склянку. Профільтрувати з допомогою фільтрувального паперу. Виготовлений зразок підготувати до вимірювання на спектрофотометрі так як і зразок для побудови калібрувальної кривої.

Провести вимірювання на спектрофотометрі.

Побудувати графік (калібрувальну криву) у залежності від оптичної щільності (ось ординат) від кількості білка в зразках (ось абсцис).

Визначити оптичну щільність досліджуваного продукту. Визначити кількість білка (мг/мл) в продукті, який досліджується з допомогою побудованої калібровальної кривої. Внести отримані значення в таблицю. Зробити висновок про якість продукту.

Отримані результати дослідження занести до таблиці.

Оформити результати дослідження за зразком таблиці 6.7.

Таблиця 6.7.

Результати визначення визначення кількості білка за поглинанням в уф –світлі при 280 нм

№ пробірки п/п	Кількість білка, мг/мл у еталонному зразку	Оптична щільність при 280 нм	№ пробірки п/п	Кількість білка, мг/мл у зразку продукту, який досліджується	Оптична щільність при 280 нм
1	1,0		1
2	0,5		2
3	0,25		3
4	0,13		4
5	0,09		5
6			6
7			7
8			8
9 (конт-роль)			9 (конт-роль)

Завдання 7. Побудувати калібрувальну криву для визначення білка за методом Лоурі

Прилади. Спектрофотометр; аналітичні ваги, рН-метр.

Обладнання. Мірні хімічні склянки на, 1000, 100, 10 мл, скляні палички оплавлені з одного кінця, піпетки; градуйовані на 5-10 мл; мірні пробірки, порцелянова ступка з товкачиком; дві хімічні склянки на (50 мл), 25 пробірок (20–25 мл), градуйовані піпетки (1 и 5 мл), штатив для пробірок, марлеві серветки, фільтрувальний папір

Реактиви. Розчин хлориду натрію (0,15 моль/л), дистильована вода, 10%-ні розчини НСl й NaОН, реактив Фоліна

Дослідні матеріали: Високоочищений ліофілізований γ-глобулін, альбумін, чи який-небудь інший білок, що добре розчиняється в хлориді натрію.

Хід виконання роботи