Меркаптопурин.
Качественные реакции.Физические методами:1)УФ-спетры), химические методы основанными на реакциях окисления, солеобразования, обнаружения в молекулах третичного азота, меркаптогруппы, остатка рибозы. Р.нитропруссидом натрия в щелочном растворе меркаптопурина = желтовато-зеленое окрашивание, переходящее при подкислении в темно-зеленое. Из меркаптопурина, растворенного в растворе NH3, выпадает под действием CuCI (II) и гидроксиламина г/х= оранжево-желтый осадок. Из растворов меркаптопурина в этаноле при+ насыщенного спиртового раствора ацетата ртути (II) = белый осадок, а под действием спиртового раствора ацетата свинца — жёлтый осадок.селенистой кислоты красный осадок, конц.HNO3=желтое окрашивание, конц.HCI в присутствии этанола и сахарозы =коричневое окрашивание.
Фоливая кислота.
Количественное определение.1)обратное алкалиметрическое.основано на образовании натриевых солей за счет незамещенных карбоксильных групп. Растворяют навеску в избытке 0,1 М раствора гидроксида натрия, а затем медленно титруют несвязавшееся количество щелочи 0,1 М раствором хлороводородной кислоты. Используют либо смешанный индикатор (фенолфталеин с метиленовым синим), либо тимол-фталеин.
2)Спектрофотометрическое определение кислоты фолиевой может быть выполнено при длине волны 365 нм (растворитель 0,1 М раствор гидроксида натрия) или 320 нм (растворитель 5 М раствор серной кислоты).3)фотоколориметрического определения (по ФС) основан на предварительном окислении перман-ганатом калия до птериновой и n-аминобензоилглутаминовой кислот
Последнюю затем диазотируют раствором нитрита натрия
сочетают с N-( 1 -нафтил)-этилендиамином:
4)Полярографическое определение кислоты фолиевой основано на ее способности легко восстанавливаться в среде карбоната натрия до 7,8-дигидрофолиевой кислоты. Обратный процесс легко происходит даже под действием кислорода воздуха:
Метотрексат.
Качественное определение.1) бумажную хроматографию (Наносят на линию старта растворметотрексата, хроматографи-руют в защищенной от света камере с фосфатным буфером (рН 5,75-5,85). Затем сушат и просматривают в УФ-свете при 254 нм. Аналогично, но с точной навеской метотрексата выполняют количественное определение,1) сочетая бумажную хроматографию с УФ-спектрофотометрией (хроматоспектрофотометрия). После хроматографирова-ния испытуемого вещества и ГСО кислоты фолиевой вырезают зоны с пятнами метотрексата, кислоты фолиевой и из полоски бумаги (для контрольного опыта). Бумагу с зонами измельчают, элюируют 0,1 М раствором гидроксида натрия по 3 раза каждую пробу. Элюаты сливают в мерные колбы, доводят до метки и спектрофотометрируют относительно контрольного раствора (элюат из чистой полосы хроматографической бумаги) элюатметотрексата при 258 нм, а кислоты фолиевой — при 256 нм. Расчет содержания метотрексата (не менее 90%) выполняют по формуле с помощью величин оптических плотностей и коэффициента пересчета. 2) ВЭЖХ, используя колонку высотой 10 см,внутренним диаметром 6 мм, заполненную силикагелем с октадецилсилильным покрытием. В качестве подвижной фазы берут смесь ацетонитрила и фосфатно-цитратного буфера (8:92). Детектором служит УФ- спектрофотометр (при длине волны 303 нм). Расчет содержания выполняют по площадям пиков испытуемого и стандартного образцов.