17 . Первый этап выделения чистой культуры бактерий.Дайте определение специфическим микробиологическим терминам: "вид", "штамм", "клон", "колония", "чистая культура".

Чистая культура бактерий – это масса клеток, которая состоит из микроорганизмов одного вида. Эти микроорганизмы являются потомством одной клетки, которая была взята для анализа. Чистая культура бактерий выводится путем пересева клеток отдельно стоящей колонии бактерий на чистую и питательную среду. Для того чтобы вывести чистую культуру бактерий, необходимо не только произвести правильный забор материала и вырастить колонию. Также необходимо правильно подобрать питательную среду – синтетическую или натуральную, а также универсальную или специального назначения.

Помимо этого, очень важным является этап посева, который необходимо провести, соблюдая все необходимые меры. Во время и после посева для получения чистой культуры бактерий их колонии необходимо обеспечить правильную температуру, влажность и аэрацию или ее отсутствие. Соблюдение таких оптимальных условий позволяет в кратчайшие сроки получить чистую культуру.

При выведении чистой культуры часто требуется отсеивание из общего числа разнородных микроорганизмов отдельных, необходимых именно в данном исследовании. А чистая культура микроорганизмов выводится уже из изолированной колонии, не пересекающейся с другими представителями микромира.

При выделении чистой культуры бактерий соблюдают несколько этапов. Первый этап представляет собой посев бактерий на плотные питательные среды, в результате чего исследователь получает колонию бактерий

Первый этап. Из исследуемого материала готовят мазок, окрашивают по Граму или другим методом и микроскопируют. Для посева исследуемый материал в случае необходиости разводят в пробирке со стерильным изотоническим раствором хлорида натрия. Одну каплю приготовленного разведения наносят петлей на поверхность питательного агара в чашку Петри и тщательно втирают шпателем в среду, равномерно распределяя материал по всей ее поверхности. После посева чашку переворачивают дном кверху, подписывают и помещают в термостат при 37°С на 18—24 ч.

Вид – является эволюционно сложившейся совокупностью особей, имеющих единый генотип, который в стандартных условиях проявляется сходными морфологическими, физиологическими, биохимическими и другими признаками.

Чистая культура – это культура микроорганизмов, выросших на питательной среде, содержащая микроорганизмы одного вида.

Штамм – это культура микроорганизмов определенного вида, выделенная на питательной среде. Колония бактериальная – это видимое невооруженным глазом образование на плотной питательной среде, имеющее характерные размеры, форму, структуру, цвет и т.д., представляющее собой популяцию бактерий, происшедшею из одной бактериальной клетки.

Клон – это совокупность одноклеточных организмов (клеток), которые произошли от одной исходной клетки в результате вегетативного размножения. 18. Классификация питательных сред.Требования, предъявляемые к питательным средам.Универсальные питательные среды.Элективные (селективные) питательные среды.Дифференциально-диагностические среды.

питательная среда — вещество или смесь веществ, применяемая для культивирования макро- и микроорганизмов. Существует множество стандартных биологических питательных сред.

Требования, предъявляемые к средам

быть питательными, то есть содержать в легко усвояемом виде все вещества, необходимые для удовлетворения пищевых и энергетических потребностей. При культивировании ряда микроорганизмов в среды вносят факторы роста — витамины, некоторые аминокислоты, которые клетка не может синтезировать.

иметь оптимальную концентрацию водородных ионов — pH, так как только при оптимальной реакции среды, влияющей на проницаемость оболочки, микроорганизмы могут усваивать питательные вещества.

Для большинства патогенных бактерий оптимальна слабощелочная среда (pH 7,2-7,4). Исключение составляютхолерный вибрион — его оптимум находится в щелочной зоне (pH 8,5-9,0) и возбудитель туберкулёза, нуждающийся в слабокислой реакции (pH 6,2-6,8).

Чтобы во время роста микроорганизмов кислые или щелочные продукты их жизнедеятельности не изменили pH, среды должны обладать буферностью, то есть содержать вещества, нейтрализующие продукты обмена.

быть изотоничными для микробной клетки; то есть осмотическое давление в среде должно быть таким же, как внутри клетки. Для большинства микроорганизмов оптимальная среда, соответствующая 0,5 % раствору натрия хлорида.

быть стерильными, так как посторонние микробы препятствуют росту изучаемого микроба, определению его свойств и изменяют свойства среды.

плотные среды́ должны быть влажными и иметь оптимальную для микроорганизмов консистенцию.

обладать определённым окислительно — восстановительным потенциалом, то есть соотношением веществ, отдающих и принимающих электроны, выражаемым индексом RH2. Например, анаэробы размножаются при RH2, не выше 5, а аэробы — при RH2 не ниже 10.

быть по возможности унифицированным, то есть содержать постоянное количество отдельных ингредиентов.

Желательно, чтобы среды́ были прозрачными — удобнее следить за ростом культур, легче заметить загрязнение среды посторонними микроорганизмами.

Классификация[править | править вики-текст]

По исходным компонентам:

натуральные среды — готовят из продуктов животного и растительного происхождения(мясо, костная и рыбная мука, кормовые дрожжи, сгустки крови и др.)

синтетические среды — готовят из определённых химически чистых органических и неорганических соединений, взятых в точно указанных концентрациях и растворённых в дважды дистиллированной воде.

искусственные среды - готовят по определенным рецептам из различных настоев или отваров животного или растительного происхождения с добавлением неорганических солей, углеводов и азотистых веществ.

По консистенции(степени плотности):

жидкие

полужидкие

плотные

Плотные и полужидкие среды готовят из жидких, к которым прибавляют агар-агар или желатин. Кроме того, в качестве плотных сред применяют свёрнутую сыворотку крови, свёрнутые яйца, картофель, среды с силикагелем. Некоторые микроорганизмы используют желатин как питательное вещество — при их росте среда разжижается.

По составу:

простые: мясопептонный бульон(МПБ), мясопептонный агар(МПА), , питательный желатин,

сложные — готовят, прибавляя к простым средам кровь, сыворотку, углеводы и другие вещества.

По назначению:

основные — служат для культивирования большинства патогенных микробов. МПБ, МПА, бульон и агар Хоттингера, пептонная вода.

специальные — служат для выделения и выращивания микроорганизмов, не растущих на простых средах.

элективные(избирательные) — служат для выделения определённого вида микробов, росту которых они благоприятствуют, задерживая или подавляя рост сопутствующих микроорганизмов. Среды становятся элективными при добавлении к ним определённых антибиотиков, солей, изменения pH.Жидкие элективные среды называют средами накопления.

дифференциально-диагностические — позволяют отличить один вид микробов от другого по ферментативной активности.

консервирующие — предназначены для первичного посева и транспортировки исследуемого материала.

Универсальные — среды, на которых хорошо растут многие виды патогенных и непатогенных бактерий. К ним относятся: мясо-пептонный бульон (МПБ = мясная вода + 1% пептона + 0,5% NaCl), мясо-пептонный агар (МПА = МПБ + 2-3% агара).

Дифференциально-диагностические — среды, позволяющие отличать одни виды бактерий от других по их ферментативной активности или культуральным проявлениям. К ним относятся среды Эндо, Левина, Плоскирева, Гисса и многие др.

Селективные (син.: избирательные, элективные, обогатительные) — среды, со­держащие вещества, используемые микроорганизмами определенных видов и не благоприятствующие или даже препятствующие росту других микроорганизмов. Се­лективные среды позволяют направленно отбирать из исследуемого материала оп­ределенные виды бактерий. Сюда относятся среды Мюллера, селенитовая, Рапопорт, 1%-ная пептонная вода и др.