4. Виды микроскопии.Приготовление фиксированных препаратов мазков. Этапы и механизмы окраски по Граму.

Различают следующие виды микроскопии: Световая микроскопия

Темнопольная микроскопия ( на черном поле зрения белые неокрашенные микроорганизмы).

 Фазово-контрастная микроскопия

Люминисцентная микроскопия (вместо дневного света используются УФ лучи)

Иммерсионная микроскопия. Позволяет получать увеличение в 1350 раз.

  Разрешающая способность – это минимальное расстояние между двумя точками, которые можно видеть раздельно. Чем меньше разрешающая способность, тем качественнее микроскоп. Микроскоп состоит из оптической и механической систем. Оптическая: линзы, зеркало, диафрагма , то есть все то, через что проходят лучи света. Механическая система: все то, что позволяет наводить оптическую систему на исследуемый объект. В иммерсионном микроскопе между препаратом и объективом наносится иммерсионное масло. Это позволяет избежать преломления. В качестве иммерсионного масла используется масло с оптической плотностью как у стекла. Разрешающая способность иммерсионного микроскопа – 0,2 микрометра. Фазово-контрастный микроскоп при помощи фазово-контрастной насадки превращает фазовые изменения светлой волны в амплитудные. Фазовые изменения световой волны не видны человеческому взгляду, а амплитудные видны. Это позволяет рассматривать прозрачные и неокрашенные объекты. Темнопольная микроскопия осуществляется при помощи специального конденсора сферической формы. При помощи этого конденсора все лучи света концентрируются на объекте изучения, поэтому, хорошо освещенные микроорганизмы видны на темном поле зрения. Иммунофлоуресцентная микроскопия. При ней под действием УФ лучей объекты изучения видны как светящиеся микроорганизмы. Свечение может быть первичным или спонтанным, когда сами микроорганизмы светятся, или вторичным (наведенным), когда объекты обрабатывают специальными ферментами, осажденными на поверхности специфических антител. Если антитела аналогичны антигенам возбудителей, то свечение есть, если неспецифичны – свечения нет. Это позволяет проводить быструю диагностику. Электронная микроскопия. В ней применяют вместо лучей света поток электронов. Величина электронов значительно меньше, чем длинна световой волны, поэтому электронная микроскопия имеет меньшую разрешающую способность (10 ангстрем) и позволяет рассмотреть отдельные структурные элементы клетки. Она более дорогая, требует большого помещения, персонала и способна исследовать только мертвые объекты и получаются черно-белые изображения.   P.S. Отличительные особенности конструкции автовышки агп 28: это малый собственный вес, большая грузоподъемность подвесных корзин, простота в монтаже и обслуживании. Выгодная аренда автокранов и экскаваторов на specmachine.ru, всегда большой ассортимент спецтехники. Автовышка агп 28 снабжена двойной системой управления, около механизма вращения и в подвесной корзине, предусмотрена возможность контроля скорости перемещения корзины. Многоуровневая система безопасности состоит из: автоматического диспетчера движения, контролирующего и запоминающего перемещение стрелы автовышки, системы контроля профиля стрелы. Система автоматического складывания в транспортное положение при потере оператором сознания в чрезвычайных ситуациях, дублирующая система аварийной остановки (в корзине и внизу). Система контроля стабилизации, аутригеров, гидравлики. Мягкую остановку вращения и перемещения стрелы, в конце каждой проведенной операции, обеспечивает система автоматического снижения скорости . Все модели автовышек пожеланию могут быть оборудованы электро - изоляцией для работы на электролиниях. Дополнительно возможна установка дистанционного управления автовышкой, как радио, так и проводного типа.

Приготовление фиксированных препаратов-мазков.  Для приготовления препарата на обезжиренное предметное стекло наносят каплю воды или изотонического раствора хлорида натрия, в которую петлей вносят исследуемый материал и распределяют его таким образом, чтобы получить тонкий и равномерный мазок. При таком распределении материала в мазке при микроскопии можно увидеть изолированные бактериальные клетки. Если исследуемый материал содержится в жидком виде, то его непосредственно наносят петлей на предметное стекло и готовят мазок. Мазки высушивают на воздухе или в струе теплого воздуха над пламенем горелки, не давая капле закипать. Для фиксации мазка предметное стекло (мазком вверх) медленно проводят 3 раза через пламя горелки. Микроорганизмы при фиксации погибают, плотно прикрепляясь к поверхности стекла, и не смываются при дальнейшей обработке. Более длительное нагревание может вызвать деформацию клеточных структур. Мазки крови, мазки-отпечатки органов и тканей и в некоторых случаях мазки из культур микроорганизмов фиксируют погружением на 15-20 мин. в метиловый или этиловый спирт, смесь Никифорова, сулемовый спирт и другие фиксирующие жидкости.

МЕТОДЫ  ОКРАСКИ  МАЗКОВ

Простой метод. Фиксированный мазок окрасить каким-либо одним красителем, например фуксином водным (1-2 мин) или метиленовым синим (3-5 мин), промыть водой, высушить и микроскопировать. Сложные методы. Последовательно нанести на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоты и др. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать одни виды микроорганизмов от других. Окрас методом Грама является сложным методом.

На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1-2 мин ее снять, а краситель слить.

Нанести раствор Люголя на 1-2 мин.

Обесцветить этиловым спиртом в течение 30-60 с до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.

Промыть водой.

Докрасить водным раствором фуксина в течение 1-2 мин, промыть водой, высушить и микроскопировать.

Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет,       грамотрицательные - в красный.