Занятие №17
Тема: Серологические реакции, типы, механизмы. Использование в диагностике инфекционных заболеваний. Иммунопрофилактика и иммунотерапия.
Вопросы для обсуждения:
Реакция связывания комплемента (РСК). Практическое применение.
Иммунные реакции с метками: реакция иммунофлюоресценции (РИФ), иммуноферментный анализ (ИФА), иммунный блоттинг (ИБ). Практическое применение.
Вакцины. Группы вакцин по способу приготовления.
Гомологичные и гетерологичные иммунные сыворотки и иммуноглобулины. Получение. Серотерапия и серопрофилактика инфекционных болезней.
Практические задания:
1. Ознакомиться с учетом результатов РСК (демонстрация отрицательной и различной степени интенсивности положительной реакции (табл. 3).
Таблица 1.
Интенсивность реакции оценивают следующим образом:
“ ++++ “ |
- полная задержка гемолиза: жидкость над эритроцитами не окрашена, эритроциты в осадке; |
“ +++ “ |
- неполная задержка гемолиза: жидкость над эритроцитами слабо-розового цвета, значительный осадок эритроцитов; |
“ ++ “ |
- частичная задержка гемолиза: жидкость красная, небольшой осадок эритроцитов; |
“ + “ |
- слабая задержка гемолиза: жидкость интенсивно красная, осадок эритроцитов незначительный; |
“ – “ |
- полный гемолиз (лаковая кровь). |
Таблица 2.
Схема основного опыта реакции связывания комплемента
Первая система |
Вторая система |
||||
Ингредиенты (в мл) |
Пробирки |
Ингредиенты (в мл) |
4-я пробирка |
||
1-я опытная |
2-я контроль сыворотки |
3-я контроль антигена |
|||
Исследуемая сыворотка, разведенная 1:5 |
0,5 |
0,5 |
- |
Гемолитическая сыворотка в тройном титре |
2,0 мл |
Антиген в рабочей дозе |
0,5 |
- |
0,5 |
||
Комплемент в рабочей дозе |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
3% взвесь эритроцитов барана |
2,0 мл |
0,85% раствор NaCl |
- |
0,5 |
0,5 |
Пробирки ставят в термостат при t 37ºС на 30 минут |
|
Пробирки ставят в термостат при t 37ºС на 1 час |
↓ |
||||
|
1,0 |
1,0 |
1,0 |
← смешивание ингредиентов |
|
После смешивания ингредиентов 1-й и 2-й систем, пробирки ставят в термостат при tº 37ºС на 1 час. Результат учитывают предварительно после извлечения пробирок из термостата и окончательно после пребывания их в течение 18-20 часов в холодильнике.
5. Нарисовать схемы постановки РИФ, ИФА.
А. |
Схема прямой РИФ
|
Б. |
Схема непрямой РИФ
|
Нарисовать схемы твердофазного ИФА:
А. |
Схема прямого ИФА
|
Б. |
Схема непрямого ИФА
|
6.
Изучить
схему постановки иммуноблоттинга.
Рис. 3. Схема иммуноблоттинга.
Подпись преподавателя ________________