- •Перечень практических навыков
- •1)Правила поведения в баклабораториях
- •2) Правила забора материала для микробиологических исследования
- •3)Правила забора материала, хранения и транспортировке при оои
- •4)Составить направление на мб исследование
- •5)Дезинфекция в микробиологической лаборатории
- •6)Подготовка посуды к стерилизации
- •7)Этапы приготовления мазка
- •9)Метод грамма
- •10) Метод Циль-Нильсена
- •8)Основные правила микроскопии (микроскопия готовых препаратов)
- •11)Окраска по Нейссеру(определение зерен волютина)
- •12)Определение подвижности микроорганизмов методом «раздавленной капли»
- •13)Выделение чистой культуры микробов(механические и биологические)
- •14)Метод дригальского
- •15)Методы культивирования анаэробов(создание анаэробных условий)
- •16)Выделение чистой культуры анаэробов
- •17) Короткий «пестрый ряд». Рост e.Coli и s.Typhi.
- •18) Идентификация бактерий посевом на триаду Хейберга
- •19)Принципы определения каталазной и плазмокоагулазной активности
- •20) Методы изучения протеолитич. Акт. Бактерий(р. На индол, сероводород и др.)
- •18) Заражение куриного эмбриона(вирусологич. Метод)
- •20)Методы индикации и титрования бактериофагов по грация и аппельману
- •21)Реакция фаголизиса
- •22) Определение фаготипа
- •24)Этапы получения рекомбинантных молекул
- •25)Метод бумажных дисков
- •26)Бактериологич. Диагностика дисбактериоза киш-ка.
- •27)Определение общего микробного числа воздуха по м. Коха и Короткова.
- •28) Определение фекального загрязнения воды по коли-индексу.
- •31)Методы выявления ф.Патогенности(токсигенности,гемолизины)
- •32)Методы выявления ф. Верул-сти(ф.Агрессии:лизоцима, гиалуронидаза, лецитоветиллазы)
- •33)Методы определения персистентных свойств бактерий
- •34)Ра на стекле
- •35)Ра Вейгля
- •36) Ра Райта
- •37)Ра Видаля
- •38)Рпга(п/дифтирийный)
- •39)Рпга(п/скарлатинозный)
- •40)Ра по Асколи
- •41)Рн токсина антитоксином по Оухтерлони
- •42)Рск Борде-Жангу
- •43)Рск Вассермана
- •44)Рит-р. Иммобилизации бледной трепонемы.
- •45) Опсоно-фагоцитарная реакция
- •46) Рн на мышах с целью установления экзотоксина
- •47)Рн(Реакция Нейтрализации) на мышах с целью идентификации вируса клещевого энцефалита
- •48)Ртга
- •50)Ифа(конкурентный способ)-опр-ие аг гепатита в
- •51)Ифа(непрямой способ)-д. СпиДа
- •52)Серологическая диагностика Вич,с помощью реакции иммуноблотинга
31)Методы выявления ф.Патогенности(токсигенности,гемолизины)
Выявление токсинов микроорганизмов. Обнаружение экзотоксинов лежит в основе лабораторной диагностики многих инфекционных заболеваний (ботулизма, энтеротоксемии овец и др.), а также микотоксикозов. В этих случаях материал, предположительно содержащий токсин, вводят (скармливают, наносят на поверхность кожи) чувствительным биологическим моделям (лабораторные, сельскохозяйственные животные и др.) и по их гибели, заболеванию, изменениям в органах и тканях судят о наличии токсина.
Кроме того, обнаружение токсинов и определение их количества необходимы для приготовления биопрепаратов. Например, иммунитет при ботулизме. Поэтому необходимо точно определять количество токсина в культуральной жидкости. В этом случае устанавливают содержание токсина в 1 мл культуральной жидкости на чувствительных животных, рассчитывая LD50, например, по методу Кербера.
Тест на гемолизин. Бактериальные гемолизины — обширная группа веществ-мембранотоксинов, которые вызывают нарушение целостности мембраны эритроцитов и их лизис.
Исследуемую культуру уколом или дробно засевают в чашки Петри с 5%-м кровяным агаром, посевы инкубируют при 37 °С 24 ч. Гемолизин, выделяемый растущей культурой бактерий, диффундирует в толщу агара и вызывает лизис эритроцитов, что проявляется в виде светлой (бета-гемолиз) или полупрозрачной (альфа-гемолиз) зоны вокруг колоний. Гемолитическую активность микроорганизма можно также определять его посевом в 1 ...5%-й кровяной бульон, который после культивирования выделяющего гемолизин микроба становится прозрачным за счет лизиса эритроцитов.
32)Методы выявления ф. Верул-сти(ф.Агрессии:лизоцима, гиалуронидаза, лецитоветиллазы)
Тест на гиалуронидазу. Гиалуронидаза — фермент, расщепляющий гиалуроновую кислоту и, как следствие, деполимеризующий межклеточное вещество. Рассматривают как фактор инвазивности бактерий
На поверхность агара в чашке Петри дробно засевают культуру P. multocida или S. equi. Затем в виде линии высевают на поверхность среды культуру микроорганизма, у которого выявляют способность к синтезу гиалуронидазы. Чашки с посевами инкубируют при 37 °С 16...24 ч. Если исследуемый микроорганизм выделяет гиалуронидазу, то она диффундирует в толщу питательной среды и разрушает капсулу тест-микроба. При анализе посевов в косопроходящем пучке света колонии S. equi (P. multocida) вблизи «штриха» исследуемой культуры меньше по размеру, серого или голубого цвета в отличие от флуоресцирующих отдаленных колоний.
Тест на лецитиназу. Лецитиназа расщепляет гидролизом лецитин. Готовят желточный агар: пептон — 20 г, гидрофосфат натрия — 2,5 г, натрий — 1 г, 0,5%-й раствор сульфата магния — 0,1 мл, глюкоза—1 г, агар—12,5 г, вода дистиллированная — 500 мл. Устанавливают рН 7,2...7,4, стерилизуют при 121 °С 15 мин, охлаждают до 55 ºС, добавляют один стерильный желток на 500 мл среды, компоненты перемешивают и смесь разливают в чашки Петри.
Исследуемую культуру засевают дробно на желточный агар, культивируют при 37...38 °С 24...48 ч. Положительный результат — появление зоны помутнения вокруг колоний.