- •Перечень практических навыков
- •1)Правила поведения в баклабораториях
- •2) Правила забора материала для микробиологических исследования
- •3)Правила забора материала, хранения и транспортировке при оои
- •4)Составить направление на мб исследование
- •5)Дезинфекция в микробиологической лаборатории
- •6)Подготовка посуды к стерилизации
- •7)Этапы приготовления мазка
- •9)Метод грамма
- •10) Метод Циль-Нильсена
- •8)Основные правила микроскопии (микроскопия готовых препаратов)
- •11)Окраска по Нейссеру(определение зерен волютина)
- •12)Определение подвижности микроорганизмов методом «раздавленной капли»
- •13)Выделение чистой культуры микробов(механические и биологические)
- •14)Метод дригальского
- •15)Методы культивирования анаэробов(создание анаэробных условий)
- •16)Выделение чистой культуры анаэробов
- •17) Короткий «пестрый ряд». Рост e.Coli и s.Typhi.
- •18) Идентификация бактерий посевом на триаду Хейберга
- •19)Принципы определения каталазной и плазмокоагулазной активности
- •20) Методы изучения протеолитич. Акт. Бактерий(р. На индол, сероводород и др.)
- •18) Заражение куриного эмбриона(вирусологич. Метод)
- •20)Методы индикации и титрования бактериофагов по грация и аппельману
- •21)Реакция фаголизиса
- •22) Определение фаготипа
- •24)Этапы получения рекомбинантных молекул
- •25)Метод бумажных дисков
- •26)Бактериологич. Диагностика дисбактериоза киш-ка.
- •27)Определение общего микробного числа воздуха по м. Коха и Короткова.
- •28) Определение фекального загрязнения воды по коли-индексу.
- •31)Методы выявления ф.Патогенности(токсигенности,гемолизины)
- •32)Методы выявления ф. Верул-сти(ф.Агрессии:лизоцима, гиалуронидаза, лецитоветиллазы)
- •33)Методы определения персистентных свойств бактерий
- •34)Ра на стекле
- •35)Ра Вейгля
- •36) Ра Райта
- •37)Ра Видаля
- •38)Рпга(п/дифтирийный)
- •39)Рпга(п/скарлатинозный)
- •40)Ра по Асколи
- •41)Рн токсина антитоксином по Оухтерлони
- •42)Рск Борде-Жангу
- •43)Рск Вассермана
- •44)Рит-р. Иммобилизации бледной трепонемы.
- •45) Опсоно-фагоцитарная реакция
- •46) Рн на мышах с целью установления экзотоксина
- •47)Рн(Реакция Нейтрализации) на мышах с целью идентификации вируса клещевого энцефалита
- •48)Ртга
- •50)Ифа(конкурентный способ)-опр-ие аг гепатита в
- •51)Ифа(непрямой способ)-д. СпиДа
- •52)Серологическая диагностика Вич,с помощью реакции иммуноблотинга
11)Окраска по Нейссеру(определение зерен волютина)
Фиксированный мазок окрашивают уксуснокислой синей 4 мин, затем сливают краску.
Промывают водой и наливают раствор Люголя на 20-30 сек.
Не промывая водой, окрашивают везувином 1-3 мин.
Промывают водой, высушивают.
NB! Тела бактерий окрашиваются в нежный светло-коричневый цвет, зерна волютина - в темно-синий, почти черный цвет.
12)Определение подвижности микроорганизмов методом «раздавленной капли»
Жгутики являются органами движения бактерий, состоят из белка флагеллина. По количеству и характеру расположения жгутиков различают бактерии, монотрихи, лофотрихи, амфитрихи и перитрихи. Жгутики обладают антигенными свойствами (Н-антиген) и дают возможность бактериям перемешаться в жидкой среде.
О наличии жгутиков можно судить по характеру движения бактерий в «раздавленной» и «висящей» каплях при опущенном конденсоре и частично прикрытой диафрагме микроскопа.
Метод «раздавленной капли»
Культуру в изотоническом растворе хлорида натрия наносят на предметное стекло и сверху накладывают покровное. Капля материала должна быть такой величины, чтобы она заполняла все пространство между покровным и предметным стеклом и не выступала за пределы покровного. Препарат рассматривают с иммерсионной системой и слегка опущенным конденсором.
Метод «висячей капли»
Необходимо иметь предметное стекло с лупочкой. Каплю культуры наносят на покровное стекло, сверху накладывают предметное стекло с лупочкой посредине, края которого предварительно обмазаны вазелином. Затем предметное стекло слегка прижимают к покровному, и препарат переворачивают покровным стеклом кверху. Получается герметично закрытая камера, в которой капля долго не высыхает.
13)Выделение чистой культуры микробов(механические и биологические)
Чистая культура — это популяция микроорганизмов одного вида. Для выделения чистой культуры аэробов используют методы, основанные на:
Механическом разобщении бактериальных клеток
Метод Дригальского - распределение капли суспензии материала с
помощью шпателя;
Рассев штрихом;
Метод Коха является количественным и позволяет определить
количество бактерий в исследуемом материале
Биологические методы:
Посев на элективные среды;
Метод Шукевича - посев материала в конденсат скошенного МПА для
выделения чистых культур бактерий, обладающих ползучим ростом
(например, протей);
Обработка кислотами и щелочами (например, микобактерии
туберкулеза);
Прогревание при 80°С для выделения споровых форм;
Заражение лабораторных животных - для диагностики зоонозов и др.
(туляремия).
Выделение чистой культуры микробов является обязательным этапом всякого бактериологического исследования. Чистая культура необходима для изучения морфологических, культуральных, биохимических и антигенных свойств, по совокупности которых определяется видовая принадлежность исследуемого микроорганизма.
Метод механического разъединения микроорганизмов, находящихся в исследуемом материале, с целью получения изолированных колоний на поверхности или в глубине питательной среды. Очень широко применяются элективные питательные среды.
При выделении чистой культуры патогенных микробов из патологического материала, загрязненного посторонней микрофлорой, прибегают иногда к заражению лабораторных животных, восприимчивых к тому виду микроба, который предполагается выделить из исследуемого материала. Биологический метод выделения чистой культуры применяется при исследовании мокроты на содержание в ней пневмококков, микобактерий туберкулеза. Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху). Три пробирки, содержащие по 15 мл мясо-пептонногоагара, ставят в водяную баню для расплавления агара. Расплавленную среду остужают до температуры 43— 45 °С. В пробирку вносят одну бактериальную петлю исследуемого материала. После этого прокаленной и остуженной; петлей содержимое 1-й пробирки переносят во 2-ю и таким же образом из 2-й в 3-ю. Приготовленные разведения микробов выливают из пробирок в стерильные чашки Петри, обозначенные номерами, соответствующими номерам пробирок. После застудневания среды с исследуемым материалом чашки помещают в термостат. Количество колоний в чашках с питательной средой уменьшается по мере разведения материала.