44)Рит-р. Иммобилизации бледной трепонемы.

Эту реакцию применяют как в диагностических целях, так и для распознавания ложноположительных результатов стандартных серологических реакций, особенно при скрытом сифилисе.

РИБТ заключается в том, что в присутствии иммобилизинов сыворотки больных сифилиса и активного комплемента бледные трепонемы теряют подвижность.

РИБТ ставят в стерильных боксах. В реакции участвуют испытуемая сыворотка, комплемент и антиген.

В РИБТ антигеном является взвесь бледных трепонем из яичка кролика в ранние сроки (7-8 суток после заражения) сифилитического орхита. Специальная среда взвеси сохраняет жизнеспособность бледных трепонем не менее суток. В РИБТ применяют комплемент морских свинок. РИБТ протекает в анаэробных условиях. Пробирки с ингредиентами помещают в микроанаэростат, из которого отсасывается атмосферный воздух и нагнетается газовая смесь (95 частей азота и 5 частей углекислого газа). Микроанаэростат с пробирками помещают в термостат (35°С) на 18-20 часов.

Параллельно с постановкой реакции производят контрольные исследования с положительной и отрицательной сывороткой крови, взятыми из предыдущего опыта.

Оценку результатов РИБТ производят после извлечения пробирок из термостата (т.е. через 18-20 часов опыта). Пастеровской пипеткой на предметное стекло наносят каплю содержимого пробирки, которую накрывают покровным стеклом и исследуют в темном поле микроскопа (объектив 40, окуляр 10). При иммобилизации до 20% бледных трепонем реакцию считают отрицательной, от 21 до 30% — сомнительной, от 31 до 50% слабоположительной, от 51 до 100% — положительной. Процент иммобилизации бледных трепонем определяют по специальной таблице.

45) Опсоно-фагоцитарная реакция

Механизм: усиление фагоцитоза микробных клеток под влиянием содружественного воздействия антител, иммунной сыворотки и комплемента.

Компоненты реакции:

1) антиген - суточная микробная культура;

2) испытуемая сыворотка больного;

3) комплемент - свежая сыворотка морской свинки;

4) фагоциты - лейкоцитарная взвесь.

Опсонины - это антитела, которые содержатся в нормальных и иммунных сыворотках и подготавливают микробы к фагоцитозу.

Реакция ставится в специальных пробирках при t=37°» минут. Затем из каждой пробирки готовят мазки, считают по, 100 фагоцитов и определяют число фагоцитированныхмикрсконтроле.

Опсонический индекс = фагоцитарный показате. сыворотки/фагоцитарный показатель нормальной сывороп

Чем выше опсонический индекс (должен быть >1), исследуемая сыворотка, и, следовательно, тем выше им! бруцеллезе).

Применяется для олределения опсонинов — антител, стимулирующих фагоцитарную активность лейкоцитов, т.е. серодиагностики инфекций, например, бруцеллёза.

Усиление фагоцитоза происходит за счёт присоединения опсонинов с активными центрами (Рав-фрагмент) к детерминантам бактерий, а затем с помощью Рс-фрагментов к Рс-рецепторам фагоцитов. В нормальной сыворотке содержится небольшое количество опсонинов, которые проявляют свое действие в присутствии комплемента. В иммунной сыворотке опсонинов больше, и их активность в меньшей степени зависит от комплемента.

Компоненты:

- Исследуемая сыворотка

- Нормальная сыворотка

- Суточная микробная культура (напр., стафилококковая)

- Фагоциты — взвесь нейтрофилов

Инкубация при 37 °С в течение 30 минут. Из каждой пробирки готовят мазки, окрашивают по Романовскому-Гимзе и считают под микроскопом количество микробов, в 100 и более нейгрофилах, т.е. определяют фагоцитарный показатель.

Фагоцитарный показатель — количество микробов, поглощенных одним нейтрофилом.

Опсонический индекс фагоцитарный показатель иммунной (исследуемой) сыворотки / фагоцитарный показатель нормальной сыворотки.

Чем выше опсонический индекс (должен быть > 1), тем выше иммунитет.

Опсоно-фагоцитарный индекс — это цифровой показатель = количество фагоцитов х оценка фагоцитоза (в зависимости от количества поглощенных микробов). Максимальный показатель -75.