- •Перечень практических навыков
- •1)Правила поведения в баклабораториях
- •2) Правила забора материала для микробиологических исследования
- •3)Правила забора материала, хранения и транспортировке при оои
- •4)Составить направление на мб исследование
- •5)Дезинфекция в микробиологической лаборатории
- •6)Подготовка посуды к стерилизации
- •7)Этапы приготовления мазка
- •9)Метод грамма
- •10) Метод Циль-Нильсена
- •8)Основные правила микроскопии (микроскопия готовых препаратов)
- •11)Окраска по Нейссеру(определение зерен волютина)
- •12)Определение подвижности микроорганизмов методом «раздавленной капли»
- •13)Выделение чистой культуры микробов(механические и биологические)
- •14)Метод дригальского
- •15)Методы культивирования анаэробов(создание анаэробных условий)
- •16)Выделение чистой культуры анаэробов
- •17) Короткий «пестрый ряд». Рост e.Coli и s.Typhi.
- •18) Идентификация бактерий посевом на триаду Хейберга
- •19)Принципы определения каталазной и плазмокоагулазной активности
- •20) Методы изучения протеолитич. Акт. Бактерий(р. На индол, сероводород и др.)
- •18) Заражение куриного эмбриона(вирусологич. Метод)
- •20)Методы индикации и титрования бактериофагов по грация и аппельману
- •21)Реакция фаголизиса
- •22) Определение фаготипа
- •24)Этапы получения рекомбинантных молекул
- •25)Метод бумажных дисков
- •26)Бактериологич. Диагностика дисбактериоза киш-ка.
- •27)Определение общего микробного числа воздуха по м. Коха и Короткова.
- •28) Определение фекального загрязнения воды по коли-индексу.
- •31)Методы выявления ф.Патогенности(токсигенности,гемолизины)
- •32)Методы выявления ф. Верул-сти(ф.Агрессии:лизоцима, гиалуронидаза, лецитоветиллазы)
- •33)Методы определения персистентных свойств бактерий
- •34)Ра на стекле
- •35)Ра Вейгля
- •36) Ра Райта
- •37)Ра Видаля
- •38)Рпга(п/дифтирийный)
- •39)Рпга(п/скарлатинозный)
- •40)Ра по Асколи
- •41)Рн токсина антитоксином по Оухтерлони
- •42)Рск Борде-Жангу
- •43)Рск Вассермана
- •44)Рит-р. Иммобилизации бледной трепонемы.
- •45) Опсоно-фагоцитарная реакция
- •46) Рн на мышах с целью установления экзотоксина
- •47)Рн(Реакция Нейтрализации) на мышах с целью идентификации вируса клещевого энцефалита
- •48)Ртга
- •50)Ифа(конкурентный способ)-опр-ие аг гепатита в
- •51)Ифа(непрямой способ)-д. СпиДа
- •52)Серологическая диагностика Вич,с помощью реакции иммуноблотинга
8)Основные правила микроскопии (микроскопия готовых препаратов)
Световой микроскоп — это обязательная принадлежность любой микробиологической лаборатории. Разрешающая способность светового микроскопа 0,2 мкм. Общее увеличение микроскопа определяется произведением объекта на увеличение окуляра.
Микроскопия с сухими объективами дает увеличение в 120-600 раз. Недостаток: часть лучей отклоняется в сторону и не достигается
хорошее освещение изучаемого объекта. Иммерсионные объективы — это объективы, которые погружают в жидкости (кедровое масло, персиковое масло). Поскольку показатели преломления стекла и иммерсионного масла практически одинаковы 1,52 , сохраняется четкость и ясность поля зрения. Полезное увеличение микроскопа достигает 2000 раз. Современный микроскоп — это точный оптический прибор, поэтому необходимо строго соблюдать ряд правил при работе с ним:
1) использовать правильное освещение;
2) хранить закрытым от пыли;
3) для чистки оптических частей применять кисточку или мягкую ткань, смоченную водой или спиртом. Раз в год микроскоп должен просматривать мастер-оптик.
9)Метод грамма
Метод Грама введен в 1884 году датским микробиологом Гансом ХристианомГрамом и является важным таксономическим признаком.
К грамположительным бактериям относятся те, у которых комплекс, образуемый генцианвиолетом и йодом, удерживается при обработке спиртом.
Грамотрицательными называют те бактерии, которые не обладают свойством удерживать комплекс и обесцвечиваются при обработке спиртом.
Способность или неспособность клеток удерживать комплекс генцианвеолета с йодом связывают с различным составом и структурой клеточной стенки бактерий.
Методика окраски.
1 .На фиксированный мазок накладывают фильтровальную бумагу, пропитанную генцианвиолетом и наносят каплю воды на 2 минуты. Генцианвиолет основная краска.
2. Бумагу сбрасывают и, не промывая водой, наливают раствор Люголя на 1 минуту. Раствор Люголя протрава: усиливает действие основной краски у грамположительных бактерий.
3. Препарат обесцвечивают 3-5 каплями спирта в течение ЗОсекунд до прекращения отхождения фиолетовых струек краски. Спирт обесцвечивающий фактор.
4. Промывают водой.
5. Докрашивают водным фуксином Пфейффера в течение 1-2 минут. Водный фуксин дополнительная краска. Грамположитель-ные бактерии (кокки) сине-фиолетового цвета, грамотрицательные (палочковидные формы) розового цвета.
6. Промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют под иммерсией.
10) Метод Циль-Нильсена
Метод используется для окраски спор и кислотоустойчивых бактерий (микобактерии туберкулеза). Кислотоустойчивость связана с наличием в клеточной стенке мяколовых кислот. Метод Циль-Нильсена основан на использовании концентрированных красителей прогревания.
Методика окраски:
1. На фиксированный мазок накладывают белую фильтровальную бумагу и наливают карболовый фуксин Циля. Препарат 2-3 раза подогревают в в пламени до появления паров. |
Карболовый фуксин-основная краска; прогревание-протрава. |
2. Препарат промывают водой, бумагу сбрасывают. |
|
3. Препарат обесцвечивают в 5% растворе серной кислоты. |
Серная кислота-обесцвечивающий фактор. |
4. Промывают водой |
|
5. Докрашивают синькой Леффлера 3-5 минут |
Синька Леффлера — дополнительная краска |
6. Промывают водой, высушивают, смотрят под иммерсией |
Кислотоустойчивые бактерии и споры рубиново- красного цвета, а остальная микрофлора — синего цвета |
|
|