3. Цветные реакции с белками на обнаружение циклических аминокислот. Задание 1. Ксантопротеиновая реакция.

В ароматических аминокислотах, содержащих бензольные кольца (тирозин, триптофан, фенилаланин), под действием азотной кислоты происходит реакция нитрования бензольного кольца, с образованием окрашенного в желтый цвет нитросоединения.

Ход работы: К 1 мл раствора белка добавляют 3-5 капель концентрированной азотной кислоты. Под влиянием кислоты появляется осадок белка, который при нагревании окрашивается в желтый цвет. Затем, пробирке дают остыть и осторожно прибавляют избыток гидроксида натрия. При этом желтая окраска переходит в оранжевую.

Задание 2. Реакция Вуазене на триптофан.

Триптофан, конденсируясь с формальдегидом, образует окрашенное соединение, которое в присутствии минеральных кислот образует соли, окрашенные в сине – фиолетовый цвет.

Ход работы: В пробирку вносят 2 мл раствора белка и 1 каплю формальдегида. К полученной смеси тщательно перемешивая, добавляют осторожно по каплям 6 мл концентрированной серной кислоты, охлаждая пробирку в ванночке со льдом. Через 10 минут в пробирку вливают, перемешивая, 10 капель раствора нитрита натрия.

Задание 3. Реакция Паули.

При взаимодействии сульфаниловой кислоты в кислой среде с нитритом натрия (калия) происходит реакция диазотирования и образуется диазобензол – сульфоновая кислота, которая в реакции с гистидином (или тирозином) образует комплексное соединение вишнево – красного цвета.

Ход работы: В пробирку вносят 1 мл раствора сульфоновой кислоты в растворе соляной кислоты, 2мл раствора натрия нитрита и после тщательного перемешивания 2мл раствора белка и 6 мл раствора карбоната натрия. Перемешивают.

Задание 4. Обнаружение хромопротеидов.

Хромопротеиды – сложные белки, состоящие из простого типа глобулина и простетической группы, которая является окрашенным веществом – пигментом. Представитель хромопротеидов – белок крови гемоглобин с простетической группой – гемом.

Ход работы: В пробирку вносят 0,5 мл крови, добавляют 1-2 капли р-ра бензидина. После перемешивания доливаем 1-2 капли раствора перекиси водорода. Наблюдают, окрашивание смеси в синий цвет.

Задание 5. Обнаружения гликопротеидов

Гликопротеиды – сложные белки, состоящие из простых белков и простетической группы, в состав которой входят углеводы типа гомополисахаридов и гетерополисахаридов.

Ход работы: В пробирку вносят кусочек вареного яичного белка и 3 мл концентрированной соляной кислоты. Содержимое пробирки, нагревают. Белок и жидкость приобретают фиолетовое окрашивание.

Реакции осаждения белков

Цель: Изучить физико – химические свойства белков (молекулярный вес, растворимость, осаждение, денатурация, амфотерность).

Нарушение факторов, стабилизирующих структуру молекулы белка, приводит к осаждению белков. Осаждение может быть с денатурацией и без нее. Обратимое осаждение (высаливание) достигается добавлением к водным растворам белков нейтральных солей щелочных металлов (NH₄Cl, Na₂SO₄, KCl). Необратимое осаждение достигается ионами тяжелых металлов, минеральными и органическими кислотами, спиртом, эфиром, алкалоидами.

Реакции осаждения белков используются, в частности, в диагностических лабораториях для исследования биологических жидкостей. Так, моча здоровых животных содержит незначительное количество белка. При некоторых патологических состояниях в моче может появиться белок (альбуминурия). Она может быть истинной (почечной), когда белок примешиваются к моче после выхода ее из почек. Это наблюдается при заболеваниях мочеточников, почечных лоханок, мочевого пузыря. Истинная альбуминурия бывает патологической и физиологической. Последняя наблюдается при сильном мышечном напряжении, переохлаждении, у новорожденных или беременных животных.