Микроскопическая оценка качества спермы

При микроскопическом исследова¬нии прежде всего определяют густо¬ту и подвижность (актив¬ность) спермиев. По густоте спермы ориентировочно устанавливают насыщенность ее спермиями, относя к густой (Г), средней (С) или редкой (Р). У быков оценка Г ставится, если все поле зрения микроскопа заполнено спермиями и в пространстве между ними не укладывается длина одного спермия. Средней считают сперму, ког¬да между спермиями хорошо выражены промежутки, равные приблизительно длине спермиев. В редкой сперме рас¬стояние между спермиями превышает их длину.

Сложнее определять густоту спермы производителей с маточным типом осе-менения, так как у них секреты прида¬точных желез очень сильно разбавляют спермиев. У всех видов животных оцен¬ка по густоте не позволяет точно устано¬вить насыщенность спермы спермиями, поэтому с переходом на использование разбавленной спермы при оценке эяку¬

лята определяют концентрацию спер¬миев.

К использованию допускают сперму быков, хряков и жеребцов с оценкой Г и С, а у баранов — только Г.

Подвижность спермиев оценивают по 10-балльной системе. Каждый балл равен 10 % спермиев, об¬ладающих поступательным движением. Если спермин имеют манежное движе¬ние (по кругу) или только колеблются, качество спермы оценивают буквой К (колебательное движение). Сперму с не¬подвижными спермиями обозначают буквой Н (некроспермия)..

Подвижность неразбавленной спер¬мы быка определяют при температу¬ре 40 °С. На теплое предметное стек¬ло наносят каплю спермы и 2—4 капли 3%-ного раствора цитрата натрия, пере¬мешивают, накрывают покровным стек¬лом и просматривают не менее трех по¬лей зрения. Поскольку оценка спермиев по подвижности достаточно субъектив¬на, то для контроля в необходимых слу¬чаях можно определять количество жи-вых и мертвых спермиев.

При оценке спермы на густоту и подвижность спермиев применяют комплексное обозначение, позволяю¬щее удобно отражать ее качество. Например, Г-10 баллов означает, что ис-следуемая сперма густая и 100 % спер- миев обладают головным прямолиней¬ным движением; Г-9 баллов означает 90%, 8 — 80, Г-7 —70% подвижных спермиев и т. д.

Концентрацию сперми- е в (количество в 1 мл эякулята) наибо¬лее точно определяют в счетной камере Горяева или другого автора (см. Практи¬кум по акушерству). Это один из основ¬ных показателей качества спермы, на который ориентируются при разбавле¬нии эякулята.

Для определения концентрации спермиев жеребцов Г. В. Паршу- тин и Е. В. Румянцева сконструировали специальные стандарты. Они представ¬ляют собой запаянные пробирки, содер¬жащие жидкость, имеющую цвет, соот¬ветствующий той или иной известной концентрации спермы. Для определе¬ния концентрации исследуемую сперму наливают в пробирку с диаметром стан¬дартных пробирок, устанавливают ря-дом с ней пробирки стандарта и подби¬рают наиболее подходящий по виду стандарт, на котором отмечено количе¬ство спермиев в 1 мл спермы.

В настоящее время станции искусст-венного осеменения пользуются фото- электроколориметрическим методом, основанным не на прямом подсчете спермиев, а на учете степени оптичес¬кой плотности спермы, т. е. мутности. Этот метод позволяет быстро (2—3 мин) определить концентрацию спермиев в сперме, но так как фотоэлектроколори¬метр создан для анализа истинных ра¬створов, а сперма является взвесью и в ней содержится большее или меньшее количество эпителиальных и других клеток, то результат нередко может быть неточным.

Для получения более точных резуль¬татов М. П. Рязанский разработал прямой метод подсчета числа спермиев в сперме на скоростном (за 37—40 с) авто¬матическом счетчике клеток — целлос- копе. С этой целью можно использовать и венгерский прибор «Пикоскель».

Определение количе¬ства мертвых спермиев. В. А. Морозов предложил использовать красители, которые окрашивают спер¬миев только мертвых и с колебательны¬ми движениями. Самый простой способ окраски спермы быков следующий. Ис¬следуемая сперма должна иметь кон¬центрацию спермиев 0,2—0,4 млрд/мл, при более высокой концентрации эяку¬лят разбавляют 3%-ным раствором цит-рата натрия до указанного показателя. Готовят 1—5%-ный раствор эозина во-дорастворимого на 3%-ном растворе ли-моннокислого натрия. На чистое обез-жиренное теплое (35 ± 2 °С) предметное стекло наносят каплю спермы, добавля¬ют 2—3 капли краски, подогретой до 30 °С, смешивают 2—4 с и делают три тонких мазка, которые высушивают. В каждом препарате подсчитывают 100— 150 спермиев, отдельно учитывая коли¬чество с окрашенными и неокрашенны¬ми головками.

Определение содержа¬ния патологических форм спермиев и включений спермы у быков проводят в мазках, окрашенных азур-эозином или другими красителя¬ми, где подсчитывают 100—200 сперми¬ев и различные включения. Среди нор¬мальных спермиев всегда находится бо¬лее или менее значительное количество патологических форм. Чаще аномалии выявляются в хвостовой части сперми¬ев, основании головки и шейки. С воз¬растом к моменту физиологической зре¬лости производителя количество ано¬мальных спермиев уменьшается. Могут встречаться самые различные патологи¬ческие формы спермиев: гигантского размера или карликовые, спермии с дву¬мя-тремя головками, но общим хвос¬том, с двумя хвостами, с укороченным хвостом, его деформацией или отсут¬ствием, с цитоплазматической капель¬кой, слишком большой или маленькой головкой и другие формы. Иногда встречаются спермии, лишенные голов¬ки, но способные двигаться

Большое количество патологических спермиев свидетельствует о нарушении спермиогенеза, о вредном влиянии па-тологически измененных секретов при-даточных половых желез и мочевых пу¬тей или, наконец, указывает на наруше¬ние правил получения спермы и ее хра¬нения во внешней среде от выделения до исследования.

В качестве конкретных причин обра-зования уродливых форм спермиев от-мечают: слабо развитые семенники; по-ражения семенника и придатка (гигант¬ские и карликовые спермии); длитель¬ные промежутки между коитусами, обусловливающие старение и распад спермиев в придатке (отдельные голов¬ки, изолированные хвосты); половое ис¬тощение производителя вследствие большой половой нагрузки или недоста¬точного кормления (спермии с цито¬плазматическими капельками в области шейки, тела и хвоста — незрелые спер¬мии). Чем ближе к головке расположена капелька, тем моложе спермий.

Большое значение в образовании па-тологических форм спермиев придается нарушению терморегулирующей функ¬ции мошонки.

Закручивание хвостов спермиев в сторону происходит при смешивании спермы с гипотоническим раствором (неправильная подготовка разбавите¬лей, попадание воды).

При микроскопическом исследова¬нии спермы выявляются следующие включения: клетки плоского, переход¬ного эпителия, клетки семенных ка¬нальцев (зернистые); форменные эле¬менты крови — эритроциты и лейкоци¬ты; гиалиновые шары, круглые или овальные, иногда слоистые и напомина¬ющие зерна крахмала, амилоидные тельца, сильно блестящие — лецитино- вые зернышки, кристаллы спермина и др. Если примесей в сперме мало, это считается нормой. Если примесей мно¬го, необходимо выявить их источник и причину.

Значительное количество патологи-ческих спермиев следует безусловно расценивать как признак наступающей импотенции.

Дегидрогеназная активность спермы быка определяется скоростью обесцве-чивания метиленовой сини в капилля¬рах или в пробирках (метод Н. П. Шер- гина). Первый вариант получил более широкое распространение в практике. На предметное стекло, подогретое до 30—37 °С, наносят каплю спермы и до¬бавляют теплой пипеткой каплю 0,01 %-ного раствора метиленовой сини, подогретого до 30 °С. Капли тщательно перемешивают и набирают смесь в теп¬лую (30—37 °С) стеклянную трубку дли¬ной 5—6 см с внутренним диаметром 0,8—1 мм, чтобы высота столбика была2— 3 см. Заполненную смесью трубочку

кладут горизонтально на лист белой бу¬маги в термостат с температурой 37 ± 0,5 °С. Записывают время начала исследования и окончания обесцвечи¬вания метиленовой сини. Дегидрогеназ- ную активность спермы (Да) в условных единицах вычисляют по формуле

Да = Пс/С/10,

где Пс — подвижность спермиев, баллы; /—вре¬мя обесцвечивания метиленовой сини в опыте, мин; С — концентрация спермиев, млрд/мл; 10 — постоянный коэффициент.

Все исследования спермы проводят при строгом соблюдении действующих стандартов и инструкций по искусст¬венному осеменению сельскохозяй¬ственных животных.

В результате исследования могут быть установлены следующие недостатки:

асперматизм (Азм) — отсутствие спермы;

олигосперматизм (Озм) — малый объем эякулята;

аспермия (А) — отсутствие в сперме спермиев;

олигоспермия (О) — недостаточное число спермиев в эякуляте;

некроспермия (Н) — мертвые спер¬мин;

тератоспермия (Т) — патологические спермин и др.

Биологическая проба спермы. Решаю¬щее значение для оценки спермы имеет определение оплодотворяющей способ¬ности спермиев. Установлено, что она может быть выявлена только в отноше¬нии определенной группы самок, нахо¬дящихся при конкретных условиях су¬ществования и времени осеменения. Оплодотворение зависит от степени родства самки и производителя, состоя¬ния их здоровья, упитанности, качества кормления и др. Поэтому для определе¬ния оплодотворяющей способности спермы лучше всего использовать здо¬ровых ремонтных телок. Правильно по¬ставленная биологическая проба спер¬мы на здоровых животных — самый на¬дежный критерий ее оценки. Все другие методы являются только косвенными, т. е. они позволяют лишь условно судить об оплодотворяющей способности спермы. Сперма считается нормальной, если оплодотворяемость от первого осе¬менения составляет не менее 70—75 %. Быки с пониженной оплодотворяющей способностью спермы дают маложиз¬ненное потомство, и их нельзя исполь¬зовать ни при искусственном, ни при ес¬тественном осеменении.На основа нии учета итогов этих осеменений уста¬навливают индивидуальную нагрузку.

Макроскопическое исследование.

результаты его служат предпосылкой для тщательного микроскопического исследования спермы, которое позволяет установить качество спермы, а также причины изменения ее внешнего вида.

Исследование спермы начинают с определения ее объема с помощью мерной пипетки, градуированного цилиндра или мензурки. Можно опреде¬лять массу эякулята взвешиванием на лабораторных весах с погрешностью не более ±0,08 г ).

Цвет, нормальной спермы белый или белый с желтым оттенком. Серова¬тый или голубоватый оттенок — при¬знак олигоспермии (недостаточное чис¬ло спермиев). Интенсивный желтый цвет обычно указывает на примесь мочи. Розоватый или красноватый — признак примеси крови, как следствие свежей травмы. Буро-красный указыва¬ет на глубокую травму половых путей давнего происхождения. Зеленоватый оттенок сперма приобретает от примеси гноя. Хлопья в сперме наблюдаются при воспалении пузырьковидных желез.

Запаха нормальная сперма не име¬ет или обладает легким запахом жиропота. При хронических, гнойных процессах в семенниках или в придаточных половых железах сперма может иметь гнилостный запах.

Консистенция спермы быка сливкообразная, барана — сметанооб-разная, жеребца и хряка — сходная с мо-локом.

. Качественные показатели спермы

Производи¬

тель Объем эякулята, мл Число спермиев в 1 мл, млрд Подвижность спермиев по 10-балльной сис- Максималь¬ный процент патологичес¬ких спермиев Максималь-ный процент незрелых спермиев

средний максимальный среднее максимальное теме (минимально допустимая)

Бык 4-5 20 1-2 6 8 18 2

Баран 1-2 5 2-4 8 8 14 2

Хряк 250 1200 0,1-0,2 1 7 20 10

Жеребец 50-100 600 0,1-0,2 0,8 5 25 10

Северный

олень 0,3 1,2 1-2 — 8 15 4