Трансплантация зародышей, цели, задачи. Подготовка доноров и реципиентов, приемы пересадки

Под трансплантацией зародышей понимают перенос зародышей из поло¬вых органов животных-доноров в поло¬вые органы животных-реципиентов. При этом в организме реципиентов на¬ступает нормальная беременность с раз¬витием зародышей, а затем и плодов.

Работы по трансплантации зароды¬шей были начаты в конце XIX в. на кро¬ликах с целью изучения развития плода и влияния организма матери на его раз¬витие (Хипп, 1891). В. С. Груздев (1897) предпринял первые попытки по опло¬дотворению яйцеклеток и инкубации зародышей млекопитающих вне орга¬низма. В дальнейшем эти опыты про¬должали многие отечественные и зару¬бежные ученые. А. В. Квасницкий впер¬вые в мире (1949—1953 гг.) получил по¬томство у свиней после пересадок яйцеклеток и зигот. Под руководством А. И. Лопырина осуществлялись успеш¬ные пересадки зародышей овец. Появи¬лись публикации о пересадках оплодот¬воренных и неоплодотворенных яйце¬клеток кроликов, коз, коров, лошадей. Практиковался хирургический метод получения и пересадки свежих зароды¬шей.

С 1970 г. научные исследования и практическое применение транспланта¬ции зародышей начали быстро разви¬ваться. В 1971 г. проведены успешные опыты по замораживанию и оттаиванию зародышей мышей, а в 1973 г. родился первый теленок после пересадки корове замороженного и оттаянного зародыша.

За Шлет (1973—1982 гг.) в Канаде по-лучили 5413 телят-трансплантатов, а в США в 1990 г., когда они были в числе 35 стран (830 членов) Международного общества трансплантации зародышей (МОТЗ, 1984), — уже 500 тыс., в СССР к 1990 г. — 12 тыс.

В последние 12 лет в области транс-плантации зародышей достигнуты ре-кордные результаты: в США от коровы- донора за год получено 136 телят, во

Франции — 80, в Германии — 57; в Рос-сийской Федерации в ВИЖ — от 44 доноров 261 теленок, на Украине в НИИЖЛиП — от 6 доноров 71 теленок.

В России образованы областные цен¬тры трансплантации зародышей и ста¬бильно получают телят-трансплантатов в Воронеже (Ю. А. Скрипицын, 1992), Туле (1987), Омске (Т. А. Авдеева, 1994), а также создан республиканский центр трансплантации зародышей в Татарста¬не РЦТЗ (Р. М. Саитов* 1995) и других республиках.

Современные методы суперовуляции позволяют увеличить в 10—20 раз число образующихся в яичниках яйцеклеток: у коров и овец — до 25, у свиней — до 40— 45, у лошадей —до 5, у грызунов —до 90. В Англии еще в 1983 г. от коровы за один раз извлекли 27 зародышей и, пе¬ресадив их реципиентам, получили 19 телят. Разрабатываются новые методы получения зародышей монозиготных близнецов (С. В. Вилладсон, Кэмб- ридж): двоен от коров, лошадей, свиней, овец, а в последние годы и из 4—8-кле¬точных зародышей — четверен коров и овец. Получены 5 пар половинных од¬нояйцовых близнецов и 46 близнецов из четвертых частей зародышей. За год от донора можно получать по 4—6 зачатий.

Длительное сохранение зародышей позволяет создавать запасы (банки заро-дышей) ценного генетического фонда и экспортировать или импортировать за-родышей высокопродуктивных и ред¬ких пород животных. Пересадка заро¬дышей животных мясных пород молоч¬ным коровам имеет неоспоримое пре¬имущество по сравнению со скрещи¬ванием мясных быков с такими корова¬ми и, следовательно, будет способство¬вать увеличению производства говяди¬ны. Возможно получение двоен путем пересадки по одному зародышу в каж¬дый рог матки или введением дополни¬тельного зародыша в небеременный рог матки. Можно получать ценный в пле-

Отборменном отношении приплод от коров местных пород, имеющих иммунитет к различным болезням.

Пересадку зародышей можно ис-пользовать и для изучения многих воп¬росов физиологии и патологии беремен¬ности, межвидовой гибридизации. На¬пример, после пересадки овцам зароды¬шей коз рождаются нормальные коз¬лята, а от коз после трансплантации им зародышей овец — ягнята.

Однако преимущество от трансплан-тации зародышей в условиях хозяйства достигается только при четком повсед-невном осуществлении комплекса агро- зооветорганизационных мероприятий. Важнейший элемент его — наличие здо-ровых, конституционально крепких до¬норов и реципиентов, обеспеченных полноценным кормлением, хорошим

содержанием и правильной эксплуата¬цией; высококвалифицированных аку- шеров-гинекологов; специального цен¬тра (пункта) трансплантации зароды¬шей с необходимым оборудованием и оснащением.

Работу по трансплантации проводят в следующем порядке:

отбор доноров и реципиентов; вызывание множественной овуляции (суперовуляции) у доноров и их осеме¬нение;

получение зародышей от доноров; оценка, культивирование и хранение зародышей;

синхронизация полового цикла ре-ципиентов с половым циклом доноров;

пересадка зародышей на стадии мо- рулы или бластулы реципиентам

ОТБОР ДОНОРОВ

Донор — это высокоценное, выдаю¬щееся животное, от которого после гор¬монального вызывания полиовуляции и осеменения спермой проверенного про-изводителя-улучшателя получают не-сколько зародышей. Отбирают только тех животных, которые обладают спо¬собностью к множественной овуляции и дают в течение длительного срока их ис¬пользования большое количество заро¬дышей, пригодных к пересадке. В каче¬стве доноров лучше использовать здоро¬вых коров в возрасте от 4 до 5 лет с хоро¬шо развитой молочной железой, при¬годной к машинному доению, и у кото¬рых не было каких-либо осложнений родов и послеродового периода. Первая стадия возбуждения полового цикла после родов должна быть синхронной и полноценной, с ярко выраженными фе-номенами: течки, полового возбужде¬ния и охоты.

Операция пересадки зародышей эко-номически выгодна только в том случае, когда в качестве доноров берут выдаю-щихся в племенном отношении живот¬ных. В некоторых случаях для получе¬ния зародышей рекомендуют использо¬вать ценных в племенном отношении коров в заключительные сроки их про¬дуктивной жизни, чтобы получить от них больше потомков.

ВЫЗЫВАНИЕ СУПЕРОВУЛЯЦИИ

Теоретические исследования и опыт проведения пересадок зародышей в производственных условиях показали, что для широкого распространения это¬го метода в практике необходимы на¬дежные источники получения оплодот¬воренных яйцеклеток или зародышей на ранних стадиях развития.

В решении данной задачи имеются два принципиальных подхода. Первый подход — это обеспечение множествен¬ной овуляции, или полиовуляции, у ко¬ров, ремонтных телок и у молодых тело- чек до наступления половой зрелости; второй подход, находящийся пока в ста¬дии разработки, — изыскание способов извлечения яйцеклеток непосредствен¬но из яичников с дальнейшим создани¬ем условий для их созревания и опло¬дотворения in vitro. В настоящее время в практике используется в основном пер¬вый способ. Животным, обычно в сере¬дине полового цикла, вводят препараты гонадотропных гормонов, вызывающих усиленный рост и развитие многих пу¬зырчатых фолликулов и их овуляцию на фоне обратного развития желтого тела.

Суперовуляцию считают достигну¬той, если произошло выделение не ме¬нее трех яйцеклеток (в отдельных случа¬ях у животных их овулирует 100 и более). Однако основная цель гормональной обработки — получение в результате су-перовуляции 10—20 яйцеклеток.

У коров и телок для вызывания мно-жественной овуляции применяют гона-дотропины гипофизарного и плацен¬тарного происхождения; для обработки используют разнообразные схемы. Наи¬более эффективны гонадотропины сы¬воротки жеребых кобыл (ГСЖК). Они вырабатываются в оболочках плода осо-быми клетками, которые внедряются в эндометрий кобылы примерно с 36-го по 40-й день беременности. Гонадотро¬пины выделяются в кровь матери. Наи¬более высокое содержание ГСЖК в кро¬ви кобыл отмечается примерно с 60-го по 90-й день беременности. Гонадотро¬пины СЖК лучше всего применять в се¬редине полового цикла: с 8-го по 15— 16-й день. Препараты вводят однократ¬но в дозе от 2 тыс. до 3 тыс. ИЕ. Через 48 ч после введения ГСЖК инъецируют простагландин Ф2 (ПГФ2) или один из его синтетических аналогов. Обычно че¬рез 2 дня наступает стадия возбуждения полового цикла с проявлением течки, общего возбуждения, охоты и овуляции. В этот период осеменяют животных-до- норов.

Преимуществом ГСЖК является их доступность (можно получать в необхо-димом количестве при наличии доста-точного числа беременных кобыл). Но они медленно инактивируются в орга¬низме, период полураспада гонадотро¬пинов в организме коров составляет 6 дней, и их еще можно обнаружить в кро¬ви через 10 дней после введения. Гона¬дотропины после овуляции оказывают вредное влияние на качество развиваю¬щихся оплодотворенных яйцеклеток. При этом увеличивается возможность формирования фолликулярных кист яичников. Поэтому были предприняты попытки ограничить действие ГСЖК путем использования сыворотки, содер¬жащей антитела. Антисыворотку к ГСЖК вводят донорам после суперову- ляторной обработки в начале проявле¬ния стадии возбуждения полового цик¬ла, но результаты не всегда бывают на¬дежными. Многие авторы считают, что благодаря введению антисыворотки у подопытных животных-доноров увели¬чивается количество овулирующих фол¬ликулов по сравнению с контрольными животными, существенно уменьшается число фолликулов с кистозной дистро¬фией, а также наблюдается положитель¬ное влияние на оплодотворяемость ову¬лирующих яйцеклеток.

С целью вызывания множественной овуляции можно применять препараты фолликулостимулирующего гормона (ФСГ). Они дают такую же эффектив¬ность, как ГСЖК, но их сложнее полу¬чать. Суперовуляцию можно вызывать ФСГ, получаемыми из гипофизов сви¬ней и овец. Эти препараты имеют корот¬кий период активности. Так, период по¬лураспада ФСГ из гипофизов овец со¬ставляет 5 ч. По этой причине их назна¬чают в снижающейся дозировке по 2 раза в день в течение 5 дней (первый и второй дни утром и вечером по 5 мг, тре¬тий день — соответственно по 4 мг, чет¬вертый — по 3 мг и пятый — по 2 мг), всего Юдоз. Вводить ФСГ обычно начи¬нают с 9-го по 11 -й день полового цикла. В ряде стран ФСГ используют в комби¬нации с лютеинизирующим гормоном (ЛГ) в соотношении 5:1 или в сочетании с простагландинами, которые инъеци¬руют на третий день после начала обра¬ботки; в среднем через 48 ч после их вве¬дения животные-доноры проявляют стадию возбуждения полового цикла.

Ряд авторов сообщают, что после применения препаратов ФСГ получают больше зародышей, пригодных к пере¬садке, чем при использовании ГСЖК.

Некоторые авторы предлагают при ис-пользовании ФСГ упростить стандарт¬ную схему обработки и вместо двукратных проводить одноразовые инъекции в тече¬ние 5 дней. Этим достигается снижение затрат труда, уменьшение стрессорных влияний обработок на донора и повыша¬ется количество овуляций с 6,4 до 8,1.

При различных режимах обработки число овулировавших фолликулов у раз¬ных животных очень сильно варьирует. Это зависит от индивидуальных особен¬ностей животных и многих других фак¬торов. Описаны различия в чувствитель¬ности к ГСЖК у животных отдельных пород и линий крупного рогатого скота. При этом молочные породы проявляют меньшую реакцию, чем мясные. У телок наблюдается более высокая реакция, чем у коров.

Коровы-доноры должны всегда по-лучать полноценный рацион. Имеются четкие доказательства, что голодание коров-доноров в период после введения ГСЖК заметно уменьшает количество овуляций. Исследования с помощью ла-пароскопа показали, что множествен¬ная овуляция у коров и телок является длительным процессом и после обще-принятой обработки (ГСЖК, ФСГ + + ПГФ2) продолжается 24 ч и более. Если в одном яичнике происходит более 9—10 овуляций, то он настолько увели¬

чивается, что фимбрии яйцепровода не-способны его окружить и часть яйцекле¬ток может попасть в брюшную полость. Имеются предположения, что исполь¬зование предварительного анализа ин-дивидуального гормонального фона у конкретных животных позволит лучше понять причины нарушений при супер- овуляторной реакции и, модифицируя гормональные обработки с учетом фи-зиологического состояния ■ животных, можно уменьшить вариабельность в ко-личестве овуляций и снизить число не-реагирующих животных.

ОСЕМЕНЕНИЕ ДОНОРОВ

Для их осеменения берут сперму вы-дающихся быков-производителей, про-веренных по качеству потомства и при-знанных улучшателями продуктивнос¬ти. Имеются доказательства, что при ис-пользовании некоторых быков дости¬гается более высокая степень оплодот¬воряемое™ коров-доноров, поэтому следует оценивать быков и по данному показателю. Отбор быков и работу со спермой проводят с соблюдением вете¬ринарно-санитарных правил и согласно действующей инструкции по искусст¬венному осеменению коров и телок. После гормональной обработки доно-ров у них с помощью быков-пробников выявляют половую охоту не менее 2 раз в день. Примерно у 10—12% животных признаки стадии возбуждения полового цикла не проявляются. Осеменение жи-вотных, у которых обнаружена охота, проводят несколько раз с 12-часовыми интервалами до ее окончания, иногда его повторяют 3—4 раза. В каждой дозе спермы должно быть не менее 40— 50 млн живых подвижных спермиев. Чаще используют способ осеменения с ректальной фиксацией шейки матки, сперму вводят в ее канал.

Некоторые зарубежные авторы пред-лагают вводить сперму в полость тела матки. Имеются также рекомендации вводить одну порцию спермы в левый, а вторую — в правый рог матки. Свежие спермии сохраняют жизнеспособность в половых путях самок дольше, чем замо-роженные и оттаянные. Поэтому при ис-пользовании свежей спермы в течение охоты можно проводить 1—2 осемене¬ния. При этом достигается более высокая степень оплодотворяемости. Нецелесо¬образно осеменять доноров в отдаленные сроки после окончания охоты, посколь¬ку в дальнейшем это может оказывать вредное влияние на степень извлечения пригодных к пересадке зародышей.

ИЗВЛЕЧЕНИЕ ЗАРОДЫШЕЙ

Оплодотворение яйцеклеток проис¬ходит в яйцепроводе. Образовавшиеся зиготы подвергаются дроблению, и большинство из них у крупного рогатого скота попадают в матку на 4-й день. За¬родыши целесообразно извлекать у ко¬ров на 7—8-й день, а у овец — на 5—6-й день после первого осеменения (до ос¬вобождения зародыша из прозрачной оболочки). Для извлечения зародышей используют два способа: нехирургичес¬кий и хирургический.

При нехирургическом способе извлечения зароды¬шей животных фиксируют в станке. Прямую кишку освобождают от содер¬жимого и проводят тщательное ректаль¬ное исследование. Определяют, сколько желтых тел находится в каждом яични¬ке. Хвост с помощью тесемки фиксиру¬ют. Проводят туалет и дезинфекцию на¬ружных половых органов и промежнос¬ти. Для прекращения перистальтики прямой кишки эпидурально вводят 10 мл 2%-ного раствора новокаина. Для вымывания зародышей из матки приме-

/ г

Рис. 42. Катетер для извлечения зародышей:

1 — корпус катетера; 2 — мандрен; 3 — труба для нагнетания воздуха; 4— баллончик для воздуха

няют различные инструменты. Боль¬шинство авторов используют гибкий од¬ноходовой катетер Фолея с упругим мандреном и надувным баллончиком (рис. 42). Инструмент должен быть сте¬рильным. Сперва катетер вводят во вла¬галище по верхнему его своду и прово¬дят под ректальным контролем через ка¬нал шейки матки в рог матки (рис. 43). Для более полного извлечения зароды¬шей нужно, не травмируя слизистую оболочку, как можно глубже ввести ин¬струмент в рог матки. После того как ка¬тетер достигнет в роге матки необходи¬мого положения, мандрен удаляют и в баллончик катетера накачивают 10— 15 мл воздуха. При этом катетер фикси¬руется в роге матки и промывная жид¬кость не вытекает мимо катетера.

Закрепив катетер, промывают по¬лость рога матки с помощью шприца

Рис. 43. Извлечение зародышей нехирургическим способом:

1 — катетер для извлечения зародышей; 2 — шейка и 3— рог матки; 4 — надувной баллончик; 5 — яичники

Люэра вместимостью 50—60 мл. В рог матки в зависимости от его величины вводят порциями от 40 до 60 мл промыв¬ной жидкости, затрачивая на промыва¬ние каждого рога не более 500 мл. На¬полнение матки промывной средой и степень ее оттока контролируют рек- тально.

Для более полного извлечения заро-дышей верхушку рога матки приподни¬мают и выпрямляют. Некоторые авторы рекомендуют яйцепровод вблизи вер¬хушки рога матки осторожно зажать большим и указательным пальцами. При этом предотвращается поступление в брюшную полость жидкости, содержа¬щей зародыши. Однако практика пока¬зывает, что поступление в брюшную по¬лость жидкости из рога матки отмечает¬ся только при наличии большого давле¬ния в матке, поэтому яйцепровод можно не зажимать. Перед извлечением катете¬ра следует удалить воздух из баллончи¬ка. Таким же образом промывают и вто¬рой рог.

В качестве среды для промывания ис-пользуют фосфатно-буферный солевой раствор (ФБС) Дюльбекко (табл. 13).

Раствор готовят на тридистиллиро- ванной воде. Первые 4 вещества раство¬ряют в 800 мл, а 5-е и 6-е — каждое от¬дельно в 100 мл. В итоге получают три раствора, которые автоклавируют, а за¬тем смешивают. В таком виде их можно хранить при 4 °С до 2 нед. Непосред¬ственно перед употреблением в ФБС вводят следующие компоненты (в рас¬чете на 1 л):

альбумин бычьей сыворотки — 4 г;

глюкоза — 1 г (5,56 ммоль);

Na-пируват — 0,036 г (0,33 ммоль);

пенициллин (калиевая соль) — 100 тыс. ЕД.

Собранную в цилиндр промывную жидкость отстаивают 20—35 мин при температуре 20—37 °С, чтобы зародыши опустились на дно, после чего верхний слой удаляют с помощью сифона. Ниж¬ний слой жидкости порционно по 20— 30 мл для обнаружения зародышей ис-

Вещество г на 1 л ММОЛЬ Вещество г на I л ММОЛЬ

NaCl 8,00 136,87 кн2Р04 0,20 1,47

КС1 0,20 2,68 СаС12 • 2Н20 0,13 0,90

Na2HP04 • 12Н20 2,90 8,09 MgCl2 • 6Н20 0,10 0,49

следуют в больших часовых стеклах или чашках Петри под бинокулярной лупой при 10—50-кратном увеличении. Най¬денных зародышей с помощью пасте¬ровской пипетки переносят в среду для кратковременного хранения (среда Дюльбекко с добавлением 20 % феталь¬ной сыворотки теленка). После оценки зародышей их культивируют при 37 °С до момента пересадки или оставляют для хранения.

Хирургическим спосо¬бом зародышей извлекают при общем или местном обезболивании. Разрезают брюшную стенку по белой линии или чаще в области голодной ямки справа или слева, подтягивают рог матки к по¬верхности раны, делают разрез вблизи его основания и вставляют специальный катетер. Затем через иглу, введенную в полость рога у его верхушки, или через канюлю, вставленную в яйцепровод, вводят специальную среду, которую вместе с зародышами собирают через катетер. При этом методе получают до 70 % жизнеспособных зародышей. У кролика, свиньи, овцы, коровы и кобы¬лы можно извлекать зародышей непос-редственно из яйцепровода (в течение первых 4 дней после осеменения). Одна¬ко хирургический способ, по мнению многих специалистов, имеет лишь науч¬ное значение. Он трудоемок, требует больших расходов, и поэтому в настоя¬щее время его применяют только у мел¬ких животных (овец, коз и др.). После операции уживотного значительно сни¬жается уровень молочной продуктивно¬сти, имеется риск потери высокоценно¬го донора при общем обезболивании. Его нельзя часто повторять, так как в послеоперационный период образуются спайки, из-за чего возникают трудности в извлечении зародышей, а затем могут развиваться необратимые изменения, приводящие к бесплодию доноров.

ОТБОР РЕЦИПИЕНТОВ

Реципиент — животное, которому трансплантируют (пересаживают) в матку одного или двух зародышей на ранней стадии их развития. После пе¬ресадки в организме реципиента долж¬ны быть обеспечены оптимальные ус¬ловия для дальнейшего развития заро¬дыша и рождения жизнеспособного плода. Реципиентов отбирают в коли¬честве 6—8 гол. на каждого донора из числа животных, не имеющих большой племенной ценности. При этом ис¬пользуют телок в возрасте 16—18 мес с массой 350—380 кг или коров не старше 7 лет. Животные должны быть здоровы¬ми, без признаков нарушения обмена веществ. Успех пересадок в значитель¬ной степени зависит от физиологичес¬ки полноценного течения половых циклов и правильного определения охоты у реципиентов. Необходимо тщательно контролировать течение последних двух половых циклов и все дальнейшие показатели регистриро¬вать в соответствующей документации (календарь полового цикла). Половые циклы должны протекать регулярно, быть полноценными, с синхронным формированием стадии возбуждения. Животных с нерегулярными, неполно¬ценными половыми циклами, с ненор¬мальной продолжительностью отдель-ных феноменов стадии возбуждения полового цикла исключают из числа ре-ципиентов. Реципиенты должны быть в состоянии средней упитанности, с хо¬рошим физическим развитием, иметь крупный, правильной формы таз. Яич¬ники и матка должны быть нормально развиты, без патологических измене¬ний.

Отобранных реципиентов еще раз обязательно обследуют перед транс-плантацией зародышей. Яичники долж¬ны быть типичными для соответствую¬щей стадии полового цикла, без кист. Уточняют степень развития и положе¬ние желтого тела.

СИНХРОНИЗАЦИЯ ПОЛОВОГО ЦИКЛА РЕЦИПИЕНТОВ И ДОНОРОВ

При пересадке зародышей состоя¬ние всего организма и половой систе¬мы реципиента, в том числе состояние яичников, фаза дифференцировки эн¬дометрия, должны соответствовать стадии развития зародышей. Только в этом случае последние попадают в ус¬ловия, благоприятные для их прижив¬ления и развития. Если разница в сро¬ках проявления полового цикла между донором и реципиентом составляет более 24 ч, то частота беременностей после пересадок резко снижается. Пе¬ресадку зародышей в производствен¬ных условиях лучше проводить при точной синхронности полового цикла у доноров и реципиентов. В случае не¬точного совпадения предпочтение от¬дается реципиентам, у которых охота проявилась несколько раньше, чем у доноров.

Результаты 2556 пересадок зароды¬шей (Schneider и др., 1980) показали, что при точной синхронизации доноров и реципиентов беременность после пере¬садки развивалась у 67 % животных. Если охота у реципиента была на 12 ч раньше или позже, чем у донора, бере¬менность устанавливали у 60—61 % ре¬ципиентов.

Пересадку зародышей реципиентам удавалось осуществить только до 16-го дня после выявления охоты. В более по¬здние сроки беременность не развивает¬ся, так как начинается обратное разви¬тие желтого тела и в проводящих по¬ловых путях протекают процессы раз¬рушения и обновления слизистых оболочек и подготовки их к очередной стадии возбуждения полового цикла. Аналогичные изменения проявляются во всем организме самки. Поэтому если имеется большое поголовье животных (200—400 реципиентов), то для осуще-ствления пересадок подбирают коров и телок, у которых стадия возбуждения полового цикла естественно наступила в те же сроки, что и у доноров. При не¬большом количестве животных-реци- пиентов возникает необходимость в синхронизации полового цикла у реци¬пиентов и доноров путем использова¬ния простагландинов и гестагенов. Че¬рез 2—3 дня после применения этих препаратов коровы и телки приходят в охоту. Необходимо учитывать, что про-явление начала стадии возбуждения по-лового цикла у отдельных животных различное, поэтому в каждом случае для своевременного и полного выявления охоты нужно проводить тщательные на¬блюдения с использованием самцов- пробников. Несвоевременное выявле¬ние животных в охоте снижает процент развития беременности после пересадки зародышей.

При использовании замороженных зародышей нет необходимости в синх-ронизации полового цикла реципиен¬тов и доноров. В этом случае зародышей можно пересаживать в сроки, когда у ре¬ципиентов естественно наступят соот¬ветствующие дни полового цикла.

ПЕРЕСАДКА ЗАРОДЫШЕЙ РЕЦИПИЕНТАМ

Пересадку зародышей осуществляют хирургическим и нехирургическим спо-собами. Непосредственно перед пере¬садкой еще раз обследуют состояние здо¬ровья и половой системы реципиентов, выявляют, в каком яичнике находится желтое тело, соответствуют ли его вели¬чина и консистенция срокам полового цикла. Наилучшим местом пересадки считают верхушку рога матки, прилегаю¬щего к яичнику с желтым телом.

Хирургический способ пересадки заро¬дышей. Чаще применяют на телках. Можно использовать оперативный дос¬туп с разрезом по белой линии живота. Подготовка и техника операции такие же, как при извлечении зародышей. Рог матки подтягивают к разрезу, его стенку перфорируют тупой иглой в участке с наименьшим количеством сосудов, примерно в 4 см от верхушки рога. Затем через маленькую ранку с помощью пас-теровской пипетки в небольшом коли¬честве среды для культивирования вво¬дят зародыш в направлении верхушки рога. После этого зашивают брюшную стенку по всем правилам хирургической операции.

Более удобным, практичным и быст¬рым является хирургический способ пересадки зародыша с разрезом брюш¬ной стенки в области голодной ямки. Оперируют животных в стоячем поло¬жении с использованием успокаиваю¬щих средств и местного обезболивания. Разрез должен быть расположен как можно дальше в каудальном направле¬нии. Верхушку рога матки подводят к разрезу, удерживая пальцами за широ¬кую маточную связку. Зародыш переса¬живают по направлению к верхушке рога матки, как при операции по белой линии живота; приживляется до 85 % зародышей.

Нехирургический способ пересадки зародышей. Более пригоден для ис-пользования его в производственных условиях. Для этого применяют раз¬личные катетеры (рис. 44). Часто ис¬пользуют прибор для искусственного осеменения Касу в модифицирован¬ной форме с длиной трубки 50 см и на¬ружным диаметром 2,5 мм. Зародыш подготавливают к пересадке в стериль¬ной тонкой трубочке диаметром 1 мм и объемом 0,25 мл. Присоединив шприц к трубочке со стороны фильтра, наби¬рают столбик среды для культивирова¬ния (высотой 1 см), затем такой же столбик воздуха и среду с зародышем (контролируя под бинокулярной лу¬пой). После этого вновь набирают столбик воздуха и среду для культиви¬рования. Набранная в трубочку среда достигает фильтра с поливиниловым спиртом; фильтр набухает и больше не пропускает воздух, поэтому из пласти¬ковой соломинки ничего не вытекает. Подготовленную трубочку с зароды¬шем вставляют в стерильный прибор для пересадки. Чтобы предотвратить инфицирование прибора при пересад¬ке, на него почти во всю длину надева¬ют пластиковую оболочку.

Реципиентов к пересадке зародышей подготавливают так же, как и доноров при нехирургическом извлечении. Для уменьшения сокращений матки, сниже¬ния возможности повреждения эндо¬метрия применяют маточный релак¬сант.

Прибор вводят во влагалище и при достижении шейки матки снимают тон¬кую оболочку. После этого прибор про¬двигают под ректальным контролем че¬рез канал шейки матки и далее в рог мат¬ки ближе к его верхушке (примерно на глубину 10 см) (рис. 45). Затем содержи¬мое из трубочки выталкивают движени¬ем внутреннего поршня и прибор быст¬ро, но осторожно извлекают из матки. Приживаемость зародышей составляет 50%.

После подсадки животным создают условия кормления и содержания в со-ответствии с зоогигиеническими требо-ваниями, не допускают травмирования и сильных отрицательных стрессовых воздействий. Организуют раннюю реф-лексологическую диагностику беремен-ности, что исключает возможность про¬пуска повторной охоты. Через 2 мес пос¬ле пересадки проводят диагностику бе-ременности и бесплодия ректальным способом.

Пересадки на 7-й день после оплодотворения более успешны, поскольку зародыши в этом возрасте меньше по-вреждаются при колебаниях темпера¬туры. К этому времени снижается мо¬торика матки, что уменьшает возмож¬ность изгнания зародышей. Результа¬тивность пересадок снижается под влиянием стресса при манипуляциях с маткой, травмировании эндометрия. Пересадка зародышей является одним из способов получения большого ко-личества телят продуктивных живот-

Рис. 45. Введение зародышей в рог матки нехирур-гическим способом:

1 — прибор для осеменения; 2 — шейка и 3 — рог матки;

4— яичник; 5— рука, введенная в прямую кишку

ных, но гарантии, что полученное по-томство будет повторять или превосхо¬дить по продуктивности своих родите¬лей, нет.

Широта использования пересадок зародышей в практике зависит от конк-ретных условий хозяйственной деятель-ности.

Такие условия стали создавать во многих регионах России: Московской (ВИЖ, Н. И. Сергеев и др.), Нижего¬родской (НСХА, А. Н. Успенский), Са¬марской (ССХА, А. М. Петров), Омской (Ю. Е. Баталин), Кировской (НИИСВ, В. И. Нетеча) областях, Республике Та¬тарстан (КГАВМ, М. Г. Миролюбов, Р. М. Саитов), а также на Украине (НИИЖЛиП, Ф. И. Осташко; Центр трансплантации зародышей «Эмбри¬он», В. В. Мадисон, В. Л. Мадисон, Л. В. Мадисон-Титова) идр.

В шести хозяйствах Татарстана Р.М. Саитов получил 102 теленка- трансплантанта. Автор для повышения эффективности стимуляции половой функции у доноров и реципиентов ус¬пешно использовал ежедневное, дву¬кратное (по 1,5—2 ч) общение их с быка¬ми-пробниками. Это обеспечило повы¬шение главных показателей метода трансплантации зародышей. При отбо¬ре доноров достигнуто увеличение на 0,35 (Р<0,001) пригодных зародышей на донора, в том числе на 5,6 % качествен¬ных.

Для полного вымывания зародышей автор на 40 % уменьшил объем жидко¬сти Дюльбеко, сократив число неком¬фортных для донора манипуляций с 20 до 12.

У подвергнутых стимуляции пробни¬ками реципиентов подсаженные заро¬дыши приживались надежнее.

Из полученных трансплантантов вы-ращены элитные быки-производители, от которых накоплено по 20 тыс. и более доз качественной спермы. От двух луч¬ших быков-трансплантантов получены дочери с молочной продуктивностью, превышающей сверстниц по массе на 138 кг и по жиру на 0,014 %.