Хранение, транспортировка, способы оттаивания и правила использования замороженной спермы

Хранение.

При хранении неразбавленной и раз­бавленной спермы вне организма изме­няется плазма и нарушается акросомный аппарат спермиев. Поэтому чем Дольше удастся сохранить жизнеспособность спермиев вне организма животно­го, тем шире можно применять метод искусственного осеменения, так как за­пасы спермы позволяют без задержки осеменять маток в любое время года, а главное — дают возможность перево­зить сперму на различные расстояния и осеменять маток в хозяйствах, располо­женных в десятках и даже тысячах кило­метров от станции искусственного осе­менения.

Существующие способы хранения спермиев вне организма, основаны на их физиологической способности перехо­дить в состояние анабиоза, в котором они находятся, продвигаясь по каналу придатка тестикула. В естественных ус­ловиях анабиоз спермиев вызывается повышенным содержанием угольной кислоты (кислотный анабиоз). Следова­тельно, в соответствующих условиях можно хранить сперму вне организма при плюсовой температуре.

Исследования показали, а практика подтвердила, что температура — надеж­ный регулятор скорости обмена веществ в сперме. Длительность хранения спер­миев определяется качеством их анаби­оза, который бывает неполным и пол­ным. При неполном анабиозе, когда об­мен веществ в спермиях только ослабля­ется в той или иной степени, возможно только краткосрочное их хранение (1-3 сут). При полном анабиозе обмен ве­ществ почти прекращается, благодаря чему создается возможность длительно­го хранения спермиев (на протяжении нескольких лет). Полный анабиоз дос­тигается при замораживании спермы.

Кратковременное хранение спермы при комнатной температуре (16—20 °С). Для хранения спермы хряков широко ис­пользуют хелатные среды. Хелатон (трилон Б) — сокращенное на­звание двунатриевой соли этилендиа-минтетрауксусной кислоты. Это соеди­нение при комнатной температуре инактивирует ферменты, подавляя, таким образом, обмен веществ у спермиев. Действие хелатона снимается, если спер­ма оказывается подогретой до температу­ры тела животного и спермин начинают двигаться. Это происходит после введе­ния спермы, разбавленной хелатной сре­дой, в половые органы самки. Известны также среды с угольной кислотой для хранения спермы быков, баранов и хряков при комнатной темпе­ратуре, но они не получили широкого распространения.

Кратковременное хранение спермы при температуре тающего льда (2—5 °С). Такая температура пригодна для хранения спермы быка, барана и жеребца. Темпе­ратура, близкая к 0°С, значительно удли­няет переживаемость спермиев и замед­ляет обменные процессы; дыхание и фруктолиз спермиев быка и барана тор­мозятся в 20—25 раз по сравнению с ин­тенсивностью этих процессов при темпе­ратуре тела животных (Н. П. Шергин).

Для охлаждения спермы используют холодильник или термосы различной конструкции, в которых температура до 2—5 °С. Применение желточных разба­вителей значительно повышает устой­чивость спермиев к температурному шоку, но полностью не устраняет его. Поэтому сперму необходимо охлаждать медленно и постепенно. После разбав­ления сперму быка выдерживают при комнатной температуре (18—20 °С) 20— 30 мин. Затем ампулы, флаконы или пробирки со спермой обертывают не­большим слоем ваты, помещают в поли­этиленовые мешочки и кладут в холо­дильник или термос со льдом. Мешочки со спермой укладывают так, чтобы они сверху были закрыты кусочками льда, что обеспечивает необходимую темпе­ратуру (2—5 °С). При такой методике хранения сперму быка используют для осеменения коров максимум 3 суток с ак­тивностью не ниже 7 баллов, хотя ее жизнеспособность сохраняется более длительное время.

Через 24ч хранения разбавленной спермы быка при температуре 2°С перфораторий спермия несколько уве­личивается, становится более контраст­ным, а через 72 ч он набухает и начинает распадаться (Г. В. Зверева и Л. А. Чер­номаз). Следовательно, качество спер­мы и ее оплодотворяющая способность с каждым днем хранения снижаются.

Разбавленную сперму барана ис­пользуют для осеменения овец в тече­ние 24 ч с активностью не ниже 8 бал­лов. Исследования А. И. Лопырина и В. К. Рабочева показал и, что свежеполу­ченная сперма барана сохраняет опло­дотворяющую способность в половых органах овцы в течение 27—30ч. Этот показатель при хранении спермы при нулевой температуре в течение суток снижается на 20 %, а через 2 сут — почти на 30%.

Сперму жеребца используют для осеменения кобыл после хранения ее не более 2 суток с активностью не ниже 5 бал­лов.

При хранении спермы любым спосо­бом всегда следует учитывать неодина­ковую способность спермиев реагиро­вать на охлаждение. Такое свойство спермиев отмечается не только у разных производителей, но и у разных эякулятов одного и того же производителя. У некоторых быков и хряков сперма при 0°С сохраняется плохо, а при темпера­туре 4—5°С получаются удовлетвори­тельные результаты. В производствен­ных условиях для хранения спермы при температуре 2—5°С пользуются термо­сами, сконструированными специально для искусственного осеменения.

В обычном пищевом термосе вмести­мостью 1 л при наличии в нем не менее 200 г льда температура поддерживается в пределах 0—1°С. При хранении на мо­розе ниже минус 5°С на термос следует надеть войлочный или ватный чехол. Если температура ниже минус 20°С, термос заполняют не льдом, а холодной водой (5—8 °С). Крышку и горловину термоса смазывают вазелином или мас­лом, чтобы они не смерзались. В термо­сах, заполненных водой, при сильных морозах сперма сможет храниться в те­чение 2—3 суток (до замерзания ²/₃ воды).

Долговременное хранение спермы. В процессе хранения спермы при 2—5°С в ней протекают обменные процессы, от­рицательно влияющие на оплодотворя­ющую способность спермиев. Длительное хранение половых клеток возможно только в условиях полного анабиоза, когда все биохимические процессы сильно замедляются. В 1948г. И. В. Смирнов впервые осу­ществил замораживание спермы жереб­цов, кроликов, быков и баранов в паке­тах из алюминиевой фольги на поверх­ности твердого диоксида углерода (ми­нус 79 °С) и в парах жидкого кислорода (минус 183°С). Однако большая часть спермиев погибала, и после оттаивания лишь 5—30 % спермиев сохраняли ак­тивное поступательное движение. При­меняя многократное осеменение такой спермой на протяжении стадии возбуж­дения полового цикла, И. В. Смирнов в 1950—1951 гг. получил ягнят и телят.

В дальнейшем английские ученые Полдж и Раусон (1952), используя за­щитное действие глицерина при охлаж­дении спермиев, разработали пригод­ный для производства метод длительно­го хранения спермы быка в жидком азо­те (минус 196°С). В настоящее время этот метод хранения спермы быка ши­роко применяется у нас и за рубежом.

Хранение спермы в жидком азоте по­зволяет значительно улучшить пород­ные качества разводимого скота, так как в тысячи раз увеличивается количество самок, осеменяемых спермой ценных производителей. Осеменение коров та­кой спермой возможно на протяжении ряда лет. У спермы быка, хранящейся в жидком азоте, оплодотворяющая спо­собность остается удовлетворительной на протяжении 25 лет. Метод долговре­менного хранения спермы значительно увеличивает возможность организации международного обмена спермой выда­ющихся быков. Для хранения спермы таких быков внутри страны и ее экспор­та во многих странах организованы спе­циальные банки спермы. Для хранения спермы в жидком азоте используется специальное холодильное оборудование.

Известно, что замороженная сперма сохраняет свои качества, когда ее хранят погруженной в жидкий азот.

Транспортировка.

В настоящее время осеменение спер­мой, доставляемой, как правило, из племпредприятий, — наиболее распро­страненная форма искусственного осе­менения.

При транспортировке спермы необ­ходимо соблюдать условия, которые мо­гут сохранить ее жизнеспособность от момента получения до осеменения. Сперму обычно перевозят в термосах, в которых она хранится. При этом необхо­димо исключить возможность поврежде­ний емкостей со спермой и термосов.

Сперму, помещенную для кратко­временного хранения, нужно предохра­нять от колебаний температуры.

Замороженную сперму перевозят в сосудах Дьюара, в которых ее и хранят.

При транспортировке таких сосудов с жидким азотом наземными видами транспорта их необходимо тщательно закреплять, так как падение сосуда мо­жет сопровождаться взрывом. При пере­возке сосудов Дьюара на самолете их за­полняют азотом только на половину гидравлической емкости.

К каждой партии отправляемой спермы прикладывают ордер, в котором указывают дату и часы получения спер­мы, кличку производителя, дозу и оцен­ку спермы.

Транспортировка спермы должна проводиться с соблюдением всех правил действующей инструкции по искусст­венному осеменению животных данно­го вида.

Способы оттаивания замороженной спермы

Вид животного	Фасовка спермы и доза	Тем-ра оттаивания, ºС	Порядок оттаивания	Продолжительность оттаивания
Бык	Необлицованные мелкие гранулы по 0,1-0,2мл.	40-42	Ампулу или флакон с 0,8—1 мл 2,9%-ного стерильного раствора цитрата натрия помещают в водя­ную баню на 2—3 мин, затем в теплый раствор опускают од­ну гранулу	5-8
	Необлицованные крупные гранулы по 0,5мл.	40-45	Выдержав в водяной бане 2—3 мин стерильный флакон, в него опускают две гранулы	90-120
	Облицованные гранулы по 0,25мл.	40	Дозу спермы пинцетом с широ­кими браншами опускают в во­дяную баню	8-10
	Соломинки по 0,25мл.	38	Соломинки погружают в водяную баню заводской пробкой вниз, ос­тавляя верхний конец ее на 0,5— 1 см выше поверхности воды	10-11
Баран	Гранулы по 0,2мл.	70-80	В разогретый водяной или электрический оттаиватель засыпают одновременно до 20 гранул; оттаявшая сперма стекает в стерильный флакон	До полного оттаивания
Жеребец	Алюминевые пакеты по 0,25мл.	40	Удерживают пакет пинцетом, его погружают в водяную баню и слегка покачивают	45-50
	Гранулы по 0,5мл.	40	В стерильную коническую кол­бу быстро насыпают гранулы в один слой и погружают колбу в водяную баню	До полного оттаивания