Работа 2. Определение скорости оседания эритроцитов (соэ)

Кровь при движении представляет собой устойчивую суспензию. Если же стабилизированную цитратом натрия кровь отстаивать в течение часа, то она разделяется на верхний светлый слой плазмы и нижний красный слой эритроцитов. Высота столбика плазмы (в мм/ч) определяет величину СОЭ. Наиболее распространенным способом определения СОЭ является способ Панченкова. Сам прибор Панченкова представляет собой штатив, в котором помещаются одна или несколько капилляров с внутренним диаметром в 1мм. Капилляры градуированы в мм от 0 (верхняя метка) до 100. Кроме того, на уровне метки 0 имеется вторая  К (кровь), а на уровне 50 мм  Р (реактив).

Ход работы. Капилляр промывает 5% раствором цитрата натрия для предупреждения свертывания крови. Затем набирают в него цитрат натрия до метки Р и выдувают его на часовое стекло. Затем в тот же капилляр дважды набирают кровь до метки К, смешивают ее с цитратом натрия на часовом стекле. Полученную таким образом смесь цитрата натрия с кровью в соотношении 1:4 набирают в капилляр до 0 и ставят в штатив. Через час определяют высоту (в мм) образовавшегося верхнего столбика плазмы в капилляре. Его величина и является мерой СОЭ.

Рекомендации к оформлению работы. В результатах укажите полученный индивидуальный показатель и пределы его колебаний у юношей и девушек подгруппы. В анализе сравните их с нормальными показателями.

Работа 3. Химический гемолиз

Гемолиз  один из способов разрушения эритроцитов, сопровождающийся выходом гемоглобина в плазму крови или в другую окружающую жидкость. Химический гемолиз вызывается действием химических веществ.

Ход работы. Берут 3 пробирки, наливают в них по 5 мл изотонического раствора (0,85-0,9% раствор NaCl), добавляют по 0,3 мл взвеси эритроцитов и взбалтывают. Затем приливают по 0,5 мл в одну пробирку  3н. раствор аммиака, в другую  эфира (или хлороформа), в третью  1н. раствор соляной кислоты. Взбалтывают содержимое пробирок и ставят на 40-60 мин в штатив. По истечении времени оценивают изменение цвета и прозрачности жидкости в пробирках.

Рекомендации к оформлению работы. В результатах укажите, в каких растворах произошел гемолиз и в какой степени (полный или частичный). В анализе объясните причины гемолиза и укажите гемолиз в каком из этих растворов вы уже наблюдали и каково его практическое значение.

Работа 4. Определение группы крови по системе аво перекрестным методом

Под группами крови по системе АВО подразумевают различные сочетания антигенных свойств эритроцитов, называемых агглютиногенами, и антител (IgM) к ним, называемых агглютининами. Определение групп крови проводится как у доноров, так и у реципиентов; лишь у реципиентов, которым переливание проводится по жизненным показаниям, возможно определение лишь агглютиногенов системы АВО.

1. Определение эритроцитарных антигенов А и В с помощью стандартных сывороток или моноклональных реагентов  цоликлонов (это асцитная жидкость мышей, в которой содержатся антитела против группоспецифических антигенов А и В человека)

Ход работы. На планшетку наносят по большой капле (0,1 мл) каждого реагента (цоликлонов анти-А, анти-В, анти-АВ) или сывороток 0(I), A(II), B(III) групп двух серий.

• Наносят по одной маленькой капле (0,03 мл) исследуемой эритросодержащей жидкости рядом с каждой каплей реагента или сыворотки.

• Смешивают чистыми стеклянными палочками каждый из реагентов с исследуемой жидкостью.

• Легко покачивают планшетку и наблюдают за реакцией агглютинации. Результаты учитывают через 3 мин после смешивания. Если наступила агглютинация, то добавляют по одной капле (0,05 мл) 0,9% раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение при покачивании планшетки до истечения 5 мин.

Рекомендации к оформлению работы. Результаты вносят в следующую таблицу, где (+) означает агглютинацию, а (-) ее отсутствие.

Результат реакции с сыворотками и цоликлонами			Исследуемые эритроциты принадлежат к группе
Сыв. III (B) Ц. анти-А	Сыв. II (А) Ц. анти-В	Сыв. I (О) Ц. анти-АВ
-	-	-	0(I)
+	-	+	А(II)
-	+	+	В(III)
+	+	+	АВ(IV)

В анализе объясните полученные результаты.

2. Определение изогемагглютининов анти-А и анти-В в сыворотке крови с помощью стандартных эритроцитов

Используют эритроциты доноров групп А и В. Эритроциты хранятся в холодильнике не более недели, применение лизированных эритроцитов недопустимо.

Ход работы.

1. Приготавливают 5% взвесь однократно отмытых в 0,9% р-ре NaCl стандартных эритроцитов.

2. В 2 маркированные пробирки помещают по 2 капли исследуемой сыворотки или плазмы.

3. Добавляют в одну пробирку 5% взвесь эритроцитов группы А, а в другую  группы В.

4. После тщательно мягко перемешивают, затем инкубируют их при комнатной температуре в течение 5 минут.

5. Центрифугируют пробирки при 2000 об/мин в течение 30 секунд.

6. Мягко покачивая пробирки, отделяют осадок от дна пробирки и взбалтывают осадок эритроцитов.

7. Определяют наличие агглютинатов, просматривая пробирку на свет.

Рекомендации к оформлению работы. Результаты вносят в таблицу, где (+) означает агглютинацию, (-)  её отсутствие.

Результат реакции		Исследуемая кровь группы		Исследуемая кровь содержит изоагглютинины
А	В
+	+		0(I)		Анти-А и анти-В
-	+		А(II)		Анти-В
+	-		В(III)		Анти-А
-	-		АВ(IV)		Не содержит

Анализ производится путём оценки и сопоставления результатов, полученных при помощи стандартных сывороток и цоликлонов и при помощи стандартных эритроцитов.