Хід роботи

Пігменти з фотосинтезуючих тканин екстрагують полярними розчинниками (етиловим спиртом, ацетоном), які руйнують їхній зв’язок з мембранами хлоропластів. При розтиранні матеріалу з неполярними розчинниками, які не здатні денатурувати білки, в екстракт переходить незначна кількість пігментів. Розтертий матеріал в спирті залишається зеленим і тоді, коли в ньому спостерігається висока активність ферменту хлорофілази, яка відщеплює від хлорофілу спирт фітол. Тоді утворюється хлорофілін зеленого кольору з такими самими спектральними характеристиками, що і хлорофіли, але з гідрофільними властивостями. Тому хлорофілін не розчиняється в полярних розчинниках, а осад на фільтрі після екстракції фотосинтетичних пігментів залишається зеленим.

Листки різних рослин подрібнюють ножицями або скальпелем. Подрібнену наважку (0,2 -0,5 г) розтирають у ступці, додаючи на кінчику скальпеля трохи СаСОз для нейтралізації кислот клітинного соку. Зволожують матеріал невеликою кількістю розчинника, розтирають до гомогенної маси і переносять на фільтр, змиваючи багаторазово ступку невеликими порціями спирту. Об'єм розчину доводять до 10 мл.

Лабораторна робота 7

Тема. Розподіл пігментів за Краусом. Одержання хлорофілінів

Мета: дослідити, що 96 % етиловий спирт екстрагує із зелених

фотосинтезуючих тканин зелені та жовті пігменти, які характеризуються різними властивостями, у тому числі розчинністю в водних полярних і безводних неполярних розчинниках. Крім того, метою досліду є ознайомлення з реакцією одержання продуктів омилення хлорофілу.

Обладнання: спиртовий екстракт пігментів, бензин, 20 % розчин гідроксиду калію, пробірки в штативах, вода.

Хід роботи

У розчинах, одержаних шляхом екстракції розтертих зелених тканин рослин полярними розчинниками, міститься суміш пластидних пігментів, які беруть участь у фотосинтезі. Хлорофіли, яких у листках значно більше, маскують при цьому каротиноїди. Пігменти можна розділити з одного екстракту за методом Крауса.

У пробірку наливають 3 мл концентрованого екстракту пігментів, добавляють у неї 6 мл бензину і 2-3 краплини води. Пробірку закривають скляною пробкою і добре збовтують її вміст. Спостерігають розшарування розчину на зелений (верхній) і жовтий (нижній) шари. У верхньому бензиновому шарі розчинені хлорофіли і каротин (сильно гідрофобні речовини), в нижньому водноспиртовому - ксантофіл.

Щоб виявити каротин, у пробірку добавляють 15 краплин 20 % розчину КОН і сильно збовтують її вміст. Спостерігають перерозподіл забарвлених шарів внаслідок утворення солі хлорофілінової кислоти (реакція омилення хлорофілу). Жовте забарвлення верхнього шару в пробірці зумовлене каротином. Солі хлорофілінової кислоти, як і хлорофіл, зелені, але характеризуються гідрофільністю і тому перерозподіляються в нижньому водноспиртовому шарі.

Лабораторна робота 8

Тема. Спостереження за флуоресценцією хлорофілу

Мета: спостерігаючи за флуоресценцією, переконатися у фотохімічній активності хлорофілу; констатувати інтенсивну флуоресценцію розчину пігменту і видиму відсутність її у живих листках. Пояснити, чому в живих листках без

застосування високочутливих приладів не можна виявити флуоресценцію.

Обладнання: спиртові екстракти пігментів, живі листки, пробірки, ультрафіолетовий освітлювач.