Задача «Основы биохимии и методами клинико-биохимических исследований»

В инструкции к биохимическому набору для определения ЛДГ указано, что линейность метода сохраняется до 1200 U/л. Определяемая вами активность ЛДГ превышает эту величину.

Задания:

1. Дайте характеристику лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и её изоферментов.

2. Расскажите о клинико-диагностическом значении определения ЛДГ и её изоферментов.

3. Дайте понятие термину «линейность».

4. Объясните, что надо предпринять, если активность измеряемого образца превышает параметры линейности.

Эталон ответа задачи:

1. Лактатдегидгеназа (ЛДГ) – фермент, участвующий в одном из конечных этапов распада глюкозы в клетках, она катализирует обратимое восстановление пировиноградной кислоты в молочную. ЛДГ находится во всех органах и тканях, по химической природе ЛДГ является белком с четвертичной структурой и состоит из 4-х субъединиц. Субъединицы представлены 2-мя видами полипептидных цепей: Н и М, поэтому возможны 5 вариантов строения молекулы ЛДГ или пять изоформ – ЛДГ₁ (НННН), ЛДГ₂ (МННН), ЛДГ₃ (ММНН), ЛДГ₄ (МММН), ЛДГ₅ (ММММ). Диагностическое значение имеет определение не самой ЛДГ, а изоферментов, так как отдельные изоформы характеризуют преимущественно определённые органы.

2. Определение изоферментного спектра чаще назначают при патологии печени и сердца. При инфаркте миокарда в течение 3-х первых суток возрастает активность ЛДГ₁ и возвращается к норме спустя 2 – 3 недели. При заболеваниях печени, сопровождающихся повреждением клеток отмечается увеличение активности изоформ ЛДГ₄, ЛДГ₅.

3. Линейность – это характеристика калибровочного графика, где сохраняется прямо пропорциональная зависимость между экстинкцией и концентрацией.

4. Необходимо развести исследуемый образец физиологическим раствором в 10 раз, повторить анализ и результат умножить на коэффициент разведения (некоторые авторы рекомендуют уменьшить время реакции).

Задача

«Методы клинических исследований»

В лабораторию доставлена выпотная жидкость из плевральной полости в количестве 200 мл. Цвет лимонно-желтый, прозрачность полная, характер серозный, без запаха, относительная плотность 1,010. Белок - 10 г/л.

Задания:

1. Расскажите, как можно уточнить - экссудат это или транссудат.

2. Назовите способ получения выпотной жидкости.

3. Расскажите, как проходит микроскопическое исследование выпотных жидкостей.

4. Расскажите, как проводят бактериоскопическое исследование выпотных жидкостей.

Эталон ответа задачи:

1.По данным исследования можно предположить, что это транссудат, так как жидкость имеет относительную плотность ниже 1,015 и содержит белок ниже г/л. Для уточнения необходимо провести пробу Ривальта на белок серомуцин, который содержится в экссудатах. Для этого в цилиндр емкостью 100 мл с дистиллированной водой, подкисленной 2-3 каплями концентрированной уксусной кислоты, добавляют 1-2 капли исследуемой жидкости. Смотрят на черном фоне. Если падающая капля образует белое облачко - проба положительна.

2. Выпотные жидкости получают путем пункции.

3. Для микроскопического исследования жидкость после тщательного перемешивания набирают в центрифужную пробирку, центрифугируют в течение 5-10 мин при 1500-3000 об/мин и готовят препараты из осадка. Микроскопируют нативные и окрашенные препараты.

Для окрашенного препарата из небольшой капли осадка готовят мазок так же, как мазок крови, высушивают на воздухе, фиксируют и окрашивают как мазок крови, сократив время окраски до 8-10 мин. В мазках исследуют морфологию клеточных элементов и подсчитывают лейкоцитарную формулу.

4.Для бактериоскопического исследования готовят два препарата: один окрашивают по Цилю-Нильсену для выявления микобактерии туберкулеза, другой - по Граму для обнаружения кокковой флоры. Транссудаты обычно стерильны, а экссудаты содержат различную флору. Гораздо более эффективен метод посева.

Задача

«Микробиология с основами эпидемиологии и методами исследования»

В микробиологическую лабораторию доставлен биоматериал (испражнения больного) с подозрением на холеру.

Задания:

1. Расскажите, как правильно провести сбор биоматериала при подозрении на холеру.

2. Перечислите среды для первичного посева биоматериала.

3. Расскажите, какие диагностические признаки данного возбудителя можно выявить микроскопическим методом.

4. Перечислите способы обеззараживания остатков исследованного материала.

Эталон ответа задачи:

1. Холера – это особо опасная инфекция, поэтому риск заражения персонала значителен. В связи с этим необходимо строго соблюдать санитарно-гигиенические требования: работа проводится в противочумном костюме 3-го типа (резиновые перчатки, маска, фартук). При подозрении на холеру испражнения (последнюю порцию) в количестве 10-20 мл собирают металлической, деревянной или картонной лопаточкой и переносят в стерильные стеклянные баночки с плотно закрывающимися пробками (под пробки закладывают пергаментную бумагу). Сверху пробку обвязывают двойным слоем вощеной или пергаментной бумаги. Сбор материала можно проводить резиновым катетером или специальной алюминиевой петлей. Время от взятия материала до проведения посевов не должно превышать 3-х часов. Лучше материал сразу брать в 1% пептонную воду, которая является для холерного возбудителя и средой накопления.

2. Для первичного посева используется 1% щелочная (пептонная) среда, на которой холерный вибрион растет в виде нежной голубоватой пленки.

3. При микроскопировании окрашенных по Граму препаратов наблюдают характерные Гр- извитые формы (вибрионы), которые проявляют подвижность при изучении их в препаратах «висячая» и «раздавленная» капли.

4. К обеззараживанию отработанного материала предъявляют особые требования, т.к. холера относится к карантинным инфекциям. Материал засыпают сухой хлорной известью в концентрации 200 г/л материала на 60 минут. Возможно применение любого другого дезинфектанта, разрешенного к использованию в данном ЛПУ.

Эталон ответов к билету №10